南方鲇Foxl2基因克隆、表達(dá)及其在性腺分化中作用的初步研究.pdf

1、Foxl2(winged helix/fbrkead tmscriptionfactor gene 2)是新近發(fā)現(xiàn)的一種在眼瞼、成體卵巢顆粒細(xì)胞中特異性表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，是翼狀螺旋/叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子超家族(winged helix/fokhead transcription factor，F(xiàn)OX)成員。在人和哺乳動(dòng)物早期發(fā)育過(guò)程中，F(xiàn)oxl2通過(guò)轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用對(duì)雌性性腺分化，特別是對(duì)顆粒細(xì)胞增殖、卵巢發(fā)育和功能的維持起重要作用。 為闡

2、明Foxl2在南方鲇性別決定和分化過(guò)程中的作用，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)RT-PCR和RACE相結(jié)合的方法從南方鲇卵巢中克隆了Foxl2全長(zhǎng)cDNA序列(GenBank Accession No．EF015396)。南方鲇Foxl2 cDNA全長(zhǎng)為1455bp，包括5’端228bp的非編碼區(qū)，900bp的蛋白質(zhì)編碼區(qū)和3’端327bp非編碼區(qū)。開(kāi)放閱讀框編碼299個(gè)氨基酸，包括105個(gè)氨基酸組成的DNA結(jié)合域(即FH結(jié)構(gòu)域，F(xiàn)H—domain)。將南

3、方鲇Foxl2序列與所有已克隆的脊椎動(dòng)物Foxl2進(jìn)行同源性比較，并構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果顯示脊椎動(dòng)物Foxl2的FH結(jié)構(gòu)域保守性最高。除此之外，C-末端比N-末端更為保守。同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)南方鲇Foxl2同其它非哺乳類(lèi)脊椎動(dòng)物一樣，缺少含14個(gè)丙氨酸組成的聚丙氨酸區(qū)和甘氨酸．脯氨酸重復(fù)區(qū)。 另外，我們對(duì)南方鲇Foxl2在南方鲇各組織中的表達(dá)模式進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)南方鲇Foxl2在腦、垂體、鰓和性腺表達(dá)，且在性腺的表達(dá)具有明顯的性別二態(tài)性

4、，卵巢表達(dá)量要高于精巢。說(shuō)明“腦-垂體-性腺”軸，特別是卵巢可能是Foxl2主要的靶組織。 雌二醇E<,2>、芳香化酶抑制劑fadrozole(F)、雌激素受體拮抗劑tamoxifen(TAM)和fadrozol+tamoxifen(F+TAM)用酒精溶解并分別與餌料混勻，對(duì)孵化后5天(day after hatching，dah)的南方鲇全雌幼魚(yú)進(jìn)行投喂處理20天，65dah時(shí)分離南方鲇腦和性腺，用半定量RT-PCR測(cè)定了Fo

5、xl2、卵巢型芳化酶Cyp19a和腦型芳化酶Cyp19b表達(dá)水平變化情況。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比較，在F、TAM和F+TAM處理組性腺中Foxl2和Cyp19a表達(dá)下調(diào)，而Cyp19b在性腺表達(dá)沒(méi)有明顯變化。同時(shí)在F、TAM和F+TAM處理組腦中Foxl2和Cyp19b表達(dá)也出現(xiàn)下調(diào)。相反E<,2>處理組性腺Foxl2和Cyp19a表達(dá)上調(diào)，而腦中Foxl2和Cyp19b表達(dá)上調(diào)。120dah組織學(xué)觀(guān)察表明，在F、TAM和F+TAM處理

6、組中均出現(xiàn)了不同程度的性逆轉(zhuǎn)，與對(duì)照組相比，性腺發(fā)生了顯著差異：卵巢壁增厚，卵巢腔減小。F組出現(xiàn)卵母細(xì)胞減少，濾泡細(xì)胞退化，體細(xì)胞數(shù)量增加：TAM組出現(xiàn)了許多濾泡細(xì)胞退化后遺留下來(lái)的空腔，且卵母細(xì)胞延長(zhǎng)變形；在F+TAM組出現(xiàn)了類(lèi)似精小囊狀結(jié)構(gòu)，精原細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì)胞；E<,2>組與對(duì)照組基本一致。同時(shí)在F、TAM和F+TAM處理組分別得到50％、76％和80％性逆轉(zhuǎn)雄魚(yú)，說(shuō)明了Foxl2、Cyp19a和Cyp196在腦和/或性腺不同的