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文檔簡介
1、黃瓜(Cucumis sativus L.)以水蘇糖作為體內(nèi)同化物的主要運輸形式,但在果實中只含有蔗糖、葡萄糖和果糖等可溶性糖。α-半乳糖苷酶( alpha-galactosidase,EC3.2.1.22)是催化黃瓜體內(nèi)水蘇糖生物分解的關(guān)鍵酶。研究α-半乳糖苷酶在果柄細(xì)胞空間表達(dá)可為闡明黃瓜體內(nèi)水蘇糖的卸出機理提供重要線索。為此,本試驗采用地高辛標(biāo)記的RNA探針,通過原位雜交方法研究了兩種堿性α-半乳糖苷酶mRNA在果柄處的分布。
2、 石蠟切片觀察結(jié)果表明黃瓜果柄內(nèi)存在雙韌維管束結(jié)構(gòu),10μm厚度的切片適合用于原位雜交研究。 根據(jù)兩種黃瓜堿性α-半乳糖苷酶cDNA序列,在非同源區(qū)段設(shè)計各自的特異引物,運用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)擴增相應(yīng)片段,連接入含RNA聚合酶啟動子的質(zhì)粒pGEM-TE中,構(gòu)建探針合成載體。進(jìn)一步采用體外轉(zhuǎn)錄法合成地高辛標(biāo)記的RNA探針,并利用點雜交檢測其標(biāo)記效率及雜交效率。結(jié)果表明:在探針濃度稀釋至0.03pg/μL時
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