2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、酚氧化酶(phenoloxidase,EC.1.14.18.1,簡稱PO)廣泛存在于動物、植物和微生物等生物體內,是昆蟲體內的一種重要酶類,在昆蟲變態(tài)發(fā)育和免疫系統(tǒng)中起著重要作用,如(1)參與表皮的硬化和黑化:(2)對卵殼的鞣化作用;(3)參與傷害防御:(4)加速傷口的愈合等。本文通過RT-PCR和RACE技術,克隆得到了編碼小菜蛾(Plutella xylostella)酚氧化酶原的兩個基因Prophenoloxidase1(PxPP

2、O1)和Prophenoloxidase2(PxPPO2):并通過Semi-Quantitative RT-PCR和Quantitative Real-timePCR研究了PPO1和PPO2在小菜蛾不同發(fā)育時期的表達情況;同時使用兩種典型的PO抑制劑-槲皮素和曲酸,對小菜蛾3齡幼蟲進行了點滴處理,測定了處理后24h、48h和72h三個時間點PPO2的表達情況。研究結果如下:
   1.PxPPO1全長cDNA序列有2838 bp

3、,包含一個2049 bp的開放閱讀框(ORF),一個144 bp的5’非編碼區(qū)(5’UTR)和一個645 bp的帶有加尾信號的3'非編碼區(qū)(3’UTR)。開放閱讀框從第145個核苷酸開始,終止于第2193個核苷酸,由其推導的氨基酸序列以甲硫氨酸為起始氨基酸,長為682個氨基酸,分子量為78.56 kDa,估測等電點pI為6.43。PxPPO1的半衰期為30h,不穩(wěn)定系數(shù)為42.01,化學分子式為C3468H5320N1000O1020S

4、38。
   2.PxPPO2全長cDNA序列有2546 bp,包含一個2091 bp的開放閱讀框(ORF),一個80 bp的5’非編碼區(qū)(5’UTR)和一個375 bp的帶有加尾信號的3’非編碼區(qū)(3’UTR)。開放閱讀框從第81個核苷酸開始,終止于第2171個核苷酸,由其推導的氨基酸序列也以甲硫氨酸為起始氨基酸,長為696個氨基酸。PxPP02的分子量為79.86 kDa,估測等電點pI為6.44。PXPPO的體外半衰期為3

5、0h,不穩(wěn)定系數(shù)為47.12,化學分子式為C3552H5459N1013O1046S24。
   3.氨基酸序列比對分析結果表明,PxPPO1基因的氨基酸序列與其它鱗翅目昆蟲PPO1基因具有較高的同源性(70.5%~74.6%):PxPPO2基因的氨基酸序列與其它鱗翅目昆蟲PPO2基因也具有較高的同源性(72.2%~78.3%)。
   4.PxPPO1和PxPPO2各均具有兩個高度保守的銅離子結合位點,及位于銅離子結合

6、位點內的6個保守的組氨酸殘基,此外,還包含一個類似于脊椎動物的α-巨球蛋白的硫羥酸酯區(qū)域。PxPPO1與PxPPO2的N端均不含信號肽,不存在跨膜結構域。
   5.PxPPO1中,α-螺旋占25.37%,隨機卷曲占55.87%,它們是PxPPO1最大量的結構元件,延伸鏈占18.77%,散布在整個蛋白質中,無β轉角存在;PxPPO2中,α-螺旋占24.57%,隨機卷曲占58.91%,同樣是最大量的結構元件,而延伸鏈占16.52%

7、,散布在整個蛋白質中,無β轉角存在。同源建模顯示二者三級結構均為“α/β型”中的“滾筒結構”。
   6.PxPPO1在成蟲中的表達量最低,設定為1.0,其在卵和4齡幼蟲中表達量最高,分別為21.78和19.51:在1齡幼蟲中表達量為6.44;在2齡、3齡和蛹中分別為15.76、14.09和16.88,較為接近。PxPPO2在成蟲中的表達量較低,設定為1.0,其在卵和4齡幼蟲中表達量最高,分別為22.34.和19.20;在1齡幼

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