輸卵管囊腫雞群4種病原調(diào)查及IBV流行毒株S1基因變異分析.pdf

1、1.雞桿菌屬(Gallibacterium)是巴氏桿菌科的一個(gè)新屬,代表種是鴨源雞桿菌(Gallibacteriumanatis),國(guó)外學(xué)者已證實(shí)雞桿菌與輸卵管炎及輸卵管囊腫有一定的關(guān)系；王川慶等首次報(bào)道了河南省部分發(fā)生輸卵管囊腫雞群有較高的雞桿菌感染率。國(guó)外有報(bào)道稱(chēng)雞桿菌經(jīng)常與產(chǎn)蛋下降綜合征病毒(egg drop syndrome,EDS76V)、雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)及

2、雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum,MG)`等混合感染,而雞桿菌可能扮演著誘發(fā)并加劇其他感染的角色。為了了解國(guó)內(nèi)輸卵管囊腫患雞雞桿菌感染的情況,并探討EDS76V、MG和IBV在雞輸卵管囊腫發(fā)生過(guò)程中所扮演的角色,作者對(duì)河南、山西部分輸卵管囊腫雞群及臨床健康雞群進(jìn)行了上述相關(guān)病原感染情況的調(diào)查:采集輸卵管囊腫雞群心、肝、脾、肺、氣管、輸卵管、卵巢和十二指腸,同時(shí)采集泄殖腔、上腭裂、喉頭和氣管棉拭子,樣品經(jīng)血平板

3、劃線培養(yǎng),對(duì)疑似雞桿菌分離物通過(guò)定位于16S RNA和23SRNA轉(zhuǎn)錄間區(qū)序列的特異性PCR擴(kuò)增鑒定。結(jié)果顯示:輸卵管囊腫雞群雞桿菌陽(yáng)性率41.67％(40/96),臨床健康雞群雞桿菌陽(yáng)性率27.3％(9/33)；棉拭子樣品的PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:所有被檢雞群中僅河南某一雞場(chǎng)不同批次雞群個(gè)別雞混合感染有IBV、EDS76V和MG,這一結(jié)果初步排除了IBV、MG和EDS76V在這些雞群輸卵管囊腫發(fā)生過(guò)程中的主要作用,說(shuō)明雞桿菌在雞輸卵管囊腫

4、中可能扮演著極為重要的角色,而且臨床健康雞群也存在雞桿菌的感染,提示人們?cè)诜乐坞u輸卵管囊腫時(shí)不可忽視雞桿菌的作用。
　　 2.IBV血清型眾多,且各血清型之間僅有部分或完全沒(méi)有交叉保護(hù)作用,給本病的防治帶來(lái)很大困難。對(duì)IBV流行毒株進(jìn)行分型對(duì)于選擇合適疫苗具有重要意義。IBV S1基因是其主要的免疫原基因,該基因全序列分析可為確定流行毒株血清型提供參考。本研究從河南部分疑似傳支感染雞場(chǎng)分離到6株病毒,并對(duì)其進(jìn)行了以下研究:

5、>　　 1)病毒接種雞胚可見(jiàn)胚體上有白色絮狀物附著,尿囊膜明顯增厚,胚體發(fā)育緩慢且有出血斑點(diǎn)；雞胚尿囊液無(wú)直接血凝性；分離物對(duì)氣管環(huán)纖毛有明顯的損傷；隨著傳代次數(shù)的增加,孵化至18日齡的雞胚可見(jiàn)典型侏儒胚變化；病毒核衣殼基因的特異性RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果為陽(yáng)性,證實(shí)所有分離株均為IBV；
　　 2)對(duì)上述分離株及參考株YI株、H120疫苗株的S1基因進(jìn)行了擴(kuò)增、克隆及序列比較。結(jié)果顯示8株IBV S1全基因長(zhǎng)度分四類(lèi),分

6、別是1632bp、1620bp、1617bp和1611bp,序列相互之間存在多位點(diǎn)的變異,同時(shí)存在插入和缺失現(xiàn)象；S蛋白裂解位點(diǎn)序列模式有HRRRR、RRFRR和RRSRR三種；同源性分析顯示呼吸道型Jin-13株與H120株同源率為97.3％,腎型YI株與ArkDPI11株同源率高達(dá)99.8％,腺胃病變型HN/SG株與各毒株同源性?xún)H有79.5％～88.4％；河南腎型分離株IN/I-{L、XP/I/09、XP/3、WZL,株與山東腎型分

7、離株之間的同源性為94.8％～99.1％；遺傳進(jìn)化分析顯示YI株與ArkDPI型毒株親緣關(guān)系最近；Jin-13株與H120株親緣關(guān)系較近,HN/HL株、XP/1/09、XP/3、WZL株和山東腎型分離株親緣關(guān)系較近,與河南HN99株親緣關(guān)系較遠(yuǎn):而HN/SG株與國(guó)內(nèi)腎型分離株親緣關(guān)系均較遠(yuǎn)。結(jié)果說(shuō)明河南地區(qū)存在不同的IBV流行毒株,而且在S1基因分子水平上發(fā)生了明顯的變異。
　　 3)在上述S1基因全序列分析的基礎(chǔ)上,對(duì)GenB