抗原抗體反應及其應用

1、,抗原抗體反應及應用,傅慧 2018年2月,2,,一、抗原抗體反應的基本原理二、抗原抗體反應的類型三、免疫標記技術的應用,內(nèi)容,3,一、抗原抗體反應的基本原理,,,4,抗原與相應抗體的特異性結合反應稱為抗原抗體反應。,抗原抗體反應,Ag,Ab,（ ）,（ ）,如同鑰匙和鎖的關系,,5,這種反應既可在機體內(nèi)進行，也可以在機體外進行。,體內(nèi)體液免疫反應,1.中和

2、作用: 中和毒素等2.溶菌、殺菌、促進吞噬3.免疫損傷: 抗體與組織或細胞反應,,沉淀（Precipitation）凝集（Agglutination）細胞溶解（cell lysis）補體結合（Complement fixation）,體外,,,抗體存在于血清中,常用血清作試驗,因此又名血清學反應,6,,6,6,,抗原抗體反應的原理1、抗原抗體結合力（4種）2、抗原抗體親和力和親合力3、親水膠體轉(zhuǎn)化疏水膠體,抗原抗體反應的

3、原理,電荷引力（靜電引力） 范德華引力 氫鍵結合力 疏水作用力,,,7,1、抗原抗體結合力 --靜電引力（electrostatic forces）,靜電引力或庫侖引力（Cou-lombic forces）是因抗原、抗體帶有相反電荷的氨基（—NH3+）與羧基基團（—COO-）間相互吸引的能力，之間的引力，距離越近引力越大。,,8,1、抗原抗體結合力

4、 --范德華引力（Van der Waals forces）,分子間（或原子間)相互接近，分子極化產(chǎn)生引力，其作用取決于分子空間構型，如：凹槽與凸起互補，抗原與抗體，酶與底物。能量小于靜電引力。,,9,1、抗原抗體結合力 --氫鍵結合力（hydrogen bond ）,是供氫體上的氫原子與受氫體上氫原子間的引力。其結合力較強于范德華引力 ，能量大于范德華引力。,,10,1、抗

5、原抗體結合力 --疏水作用力（hydrophobic interactions）,水溶液中兩個疏水基團相互接觸，由于對水分子的排斥而趨向聚集的力。作用力最強，占總結合力的50％。,,11,靜電引力：異性相吸（electrostatic forces），離子鍵（Ionic bond）范德華引力: 作用最小（van der Waals interactions）氫鍵: 最具特異性（hy

6、drogen bond ）疏水作用力: 作用最大 （hydrophobic interactions）,疏水作用力>氫鍵結合力>靜電引力>范德華引力,1、抗原抗體結合力,,12,2、抗原抗體親和力和親合力,是指抗體分子上一個抗原結合點與對應的抗原決定簇之間相適應而存在著的引力，是抗原抗體間固有的結合力。,親和力（affinity),,13,親和力是指反應系統(tǒng)中復雜抗原與相應抗體之間的結合能力。與抗體結合價、抗體的親和

7、性、抗原有效表位數(shù)目等相關。,親合力(avidity),2、抗原抗體親和力和親合力,3、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體,抗體和大多數(shù)抗原同屬蛋白質(zhì)。在通常的血清學反應條件下均帶有負電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體，因此蛋白質(zhì)不會自行凝集出現(xiàn)沉淀。當抗原與抗體結合后，表面電荷減少，水化層變薄;而且由于抗原抗體復合物形成后，與水接觸的表面積減少，由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。此時在電解質(zhì)(如NaCl，的作用下，使各疏水膠體之間進一步

8、靠攏、沉淀，形成可見的抗原抗體復合物。,14,,,可見反應 (沉淀),抗原抗體復合物 (疏水膠體),電解質(zhì),抗原(親水膠體),抗體(親水膠體),+,,15,二、抗原抗體反應的類型,,16,抗原抗體反應的類型,或,,17,抗原抗體反應的類型,,18,抗原抗體反應的類型,19,三、免疫標記技術的應用,,20,免疫標記技術的應用,免疫標記技術是用熒光素、放射性同位素、酶等標記抗體或抗原等所進行的抗原抗

9、體反應。,特點：敏感度高 特異性強 快速 容易觀察 能進行定性、定量、定位檢測等,,21,1、熒光免疫技術,將結合有熒光素的熒光抗體進行抗原抗體反應的技術。 常用的熒光素有異硫氰酸熒光素（FITC)和羅丹明（RB200)等。它們可與抗體球蛋白中賴氨酸的氨基結合，在藍紫光激發(fā)下，可分別出現(xiàn)鮮明的黃綠色及玫瑰紅色。,,22,,①自身抗體檢測,抗核抗體

10、 (均質(zhì)型),抗核抗體 (核膜型),抗核抗體 (斑點型),,歐蒙,熒光免疫技術的應用,,23,熒光免疫技術的應用,②病原體檢測,,呼吸道合胞病毒,流感病毒A/B型,副流感病毒,③免疫病理檢測,④細胞表面抗原和受體檢測,⑤特殊應用：流式細胞分析,,24,2、放射免疫技術及其應用,用放射性同位素標記技術來檢測抗原抗體反應的高靈敏度方法。反應特點：靈敏，精確；不穩(wěn)定 ；安全性差,標記Ag或Ab,,標記物純化,,抗原抗體反應,,抗原抗體復合

11、物沉淀,測定其放射活性,,,現(xiàn)臨床實驗室應用較少,廣泛應用于生物醫(yī)學研究和臨床診斷領域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、小分子藥物和腫瘤標志物的定量分析等,,25,3、酶免疫技術,將待測抗原或抗體吸附于固相表面（聚苯乙烯微量反應板），與酶標記的抗體或抗原反應后，加入底物反應（顯色或發(fā)光）的分析方法。,,26,方法,（1）直接法（可檢測抗原或抗體）：,,27,（2）間接法（有兩種抗體參與，一抗做反應橋梁）,1Ab,2Ab酶,一抗,二抗,,28,（

12、3）夾心法（不同抗體將抗原夾在中間反應）,① 直接夾心法,② 間接夾心法,,29,酶聯(lián)免疫吸附實驗——夾心法,,30,ELISA 應用的范圍很廣，而且正在不斷地擴大。臨床實驗室主要應用于：1、傳染病的診斷，病毒如病毒性肝炎（甲肝抗體、乙肝三對、丙肝抗體、丁肝抗體、戊肝抗體）、風疹病毒、皰疹病毒、輪狀病毒等；2、細菌如結核桿菌、幽門螺桿菌等；3、也用于一些蛋白質(zhì)的檢測，如各種免疫球蛋白、補體、腫瘤標志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺