耳聾基因檢測(cè)與耳聾一級(jí)預(yù)防final

1、柴 永 川蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院 耳鼻咽喉科,耳聾基因檢測(cè)與一級(jí)預(yù)防,耳聾防治 是重大醫(yī)學(xué)難題,全球聽(tīng)力障礙人數(shù)(WHO),N Engl J Med. 2007,,耳聾基礎(chǔ),——數(shù)據(jù)來(lái)自：第二次（2006年）全國(guó)殘疾人抽樣調(diào)查,中國(guó)耳聾人群龐大,,耳聾基礎(chǔ),先天性聽(tīng)力障礙發(fā)病率： 1-3‰ 全國(guó)每年新增耳聾患兒： 2-6萬(wàn),先天性聽(tīng)力障礙－發(fā)病率高,每10000新生兒中先天性出生缺陷的發(fā)生率,,耳聾基礎(chǔ),導(dǎo)致嚴(yán)重后果：語(yǔ)言障礙（

2、十聾九啞）目前無(wú)有效治療方法，主要依賴助聽(tīng)器與人工耳蝸植入等輔助手段影響終生：家庭社會(huì)負(fù)擔(dān)沉重每個(gè)聽(tīng)障患兒增加社會(huì)成本約20-50萬(wàn)元,先天性聽(tīng)力障礙－危害性高,,耳聾基礎(chǔ),效果依賴早期發(fā)現(xiàn)、早期診治和防控,助聽(tīng)器驗(yàn)配,人工耳蝸植入,先天性聽(tīng)力障礙－高度可干預(yù)性,言語(yǔ)康復(fù)訓(xùn)練,,耳聾基礎(chǔ),先天性耳聾防治思路,,,,東部地區(qū),中部地區(qū),西部地區(qū),UNHS及干預(yù)網(wǎng)絡(luò)的建立與實(shí)施,聾病基因孕前產(chǎn)前篩查降低出生率,,,,高危因素篩查及

3、干預(yù)模式的建立與實(shí)施,,,關(guān)口前移,重心下移,重心下移,,,偏遠(yuǎn)地區(qū),,重心下移,,兒童保健網(wǎng)絡(luò)篩查及干預(yù),,耳聾基礎(chǔ),耳聾的病因復(fù)雜：遺傳性病因占主要部分,明確的遺傳因素為耳聾的預(yù)防創(chuàng)造條件,,耳聾基礎(chǔ),非綜合征性耳聾基因>60個(gè)顯性 30個(gè)隱性 50個(gè)線粒體 2個(gè)X-連鎖 4個(gè)綜合征性耳聾基因>40個(gè),遺傳性耳聾具高度遺傳異質(zhì)性,——Hereditary hearing loss Homepag

4、e,,耳聾基礎(chǔ),常見(jiàn)耳聾基因少，占遺傳因素多,《Journal of translational medicine》:GJB2 mutation spectrum in 2063 Chinese patients with non-syndromic hearing impairment,《American journal of medical genetics》:Molecular etiology of hearing impair

5、ment associated with non-syndromic enlarged vestibular aqueduct in East China.,《 American journal of human genetics 》:Maternally inherited aminoglycoside-induced and nonsyndromic deafness is associated with the novel C14

6、94T mutation in the mitochondrial 12S rRNA gene in a large Chinese family.,針對(duì)常見(jiàn)耳聾基因的一級(jí)預(yù)防具有高度可行性,常見(jiàn)耳聾基因占遺傳性耳聾50%以上，藥物性耳聾40%以上GJB2 （～40%-50%）SLC26A4 （～15%-20%）線粒體基因 （40%以上藥物性耳聾）,,常見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),,,基因檢測(cè)與婚育指導(dǎo),產(chǎn)前診斷,常見(jiàn)耳聾基因篩查,,,,,常

7、見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),聾病基因篩查在北京、上海等重點(diǎn)城市已得到初步開(kāi)展，篩查技術(shù)成熟GJB2SLC26A4線粒體DNA突變熱點(diǎn),,常見(jiàn)耳聾基因篩查,常見(jiàn)聾病基因篩查使先天性聽(tīng)力障礙的預(yù)防成為可能,,常見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),耳聾基因篩查與預(yù)防模式,高危篩查模式目標(biāo)：高危人群（耳聾人群及其親屬等）篩查手段：全序列測(cè)定為主（GJB2、SLC26A4和MT-RNR1）篩查時(shí)間：孕前、婚前、戀前普遍篩查模式目標(biāo)：正常聽(tīng)力人群篩查手段：快速篩

8、查為主，序列測(cè)定為輔(GJB2、SLC26A4和MT-RNR1三大基因的熱點(diǎn)突變)篩查時(shí)間：孕前或孕早期,,常見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),耳聾基因高危篩查,試點(diǎn)及合作單位：上海市長(zhǎng)寧區(qū)殘聯(lián)會(huì)員,,常見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),GJB2雙等位基因突變（29.5%）,SLC26A4雙等位基因突變（14.1%）,線粒體基因突變（6.0%）,原因不明：（50.3%),,,,,常見(jiàn)耳聾基因突變檢出比例：49.7%,耳聾基因高危篩查,N>200例,,常見(jiàn)耳聾基因檢

9、測(cè),耳聾基因高危篩查,優(yōu)缺點(diǎn)分析,,常見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),耳聾基因普遍篩查,,育齡或孕早期女性,,隱性基因突變攜帶者,,配偶基因芯片篩查,,耳聾基因芯片篩查,,夫婦雙方均為同證基因突變攜帶者,,線粒體A1555G突變,,產(chǎn)前基因診斷,,遺傳咨詢,,藥物性耳聾遺傳咨詢,,,,,,,,,,常見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),有效檢測(cè)樣本（懷孕早期孕婦）：3056例孕婦中攜帶耳聾基因突變160例，占總樣本的5.23%。攜帶者自身均聽(tīng)力正常，157例無(wú)家族史，3

10、例MT突變?cè)袐D家族多人有藥物性聾病史。MT突變7例，對(duì)母系成員進(jìn)行氨基糖苷類抗生素藥物預(yù)警，以避免藥物性耳聾全序列檢測(cè)非MT突變的陽(yáng)性孕婦配偶124例，13家庭具隱性遺傳性耳聾生育風(fēng)險(xiǎn)， 5例進(jìn)行了產(chǎn)前診斷，1例胎兒為p.V37I/c.235delC復(fù)合雜合，其余為突變攜帶或野生型。,耳聾基因普遍篩查,,常見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),耳聾基因普遍篩查,優(yōu)缺點(diǎn)分析,,常見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),耳聾基因診斷與遺傳咨詢實(shí)例,產(chǎn)前基因診斷可有效預(yù)防隱性遺傳性耳

11、聾的再生育風(fēng)險(xiǎn),,耳聾遺傳咨詢,,,,,,父母耳聾，孩子個(gè)個(gè)耳聾,同證婚配：后代100%會(huì)耳聾,耳聾基因診斷與遺傳咨詢實(shí)例,聾人婚前進(jìn)行耳聾基因檢查，可避免同證婚配的出現(xiàn),,,,,,,耳聾遺傳咨詢,,,,,AA;bb aa;BB,?,攜帶不同隱性耳聾基因突變的聾人夫婦可生育正常聽(tīng)力的孩子,耳聾基因診斷與遺傳咨詢實(shí)例,,耳聾遺傳咨詢,,Bb,耳聾基因診斷可為遺傳性耳聾高危人群提供生育風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及預(yù)防,,耳聾基因診斷與遺傳咨詢

12、實(shí)例,,耳聾遺傳咨詢,,,,,C,?,攜帶線粒體耳聾基因突變的人群通過(guò)指導(dǎo)可避免藥物性耳聾的發(fā)生,耳聾基因診斷與遺傳咨詢實(shí)例,,耳聾遺傳咨詢,耳聾基因遺傳咨詢與診斷,了解病因，幫助確診 預(yù)防下一代聾病的發(fā)生 預(yù)防親屬或下一代藥物性耳聾的可能,,耳聾遺傳咨詢,罕見(jiàn)已知耳聾基因檢測(cè),非常見(jiàn)耳聾基因致病患者的分子病因 罕見(jiàn)已知耳聾基因致病？ 罕見(jiàn)已知耳聾基因眾多，如何檢測(cè)？,,罕見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),本研究所檢測(cè)的79個(gè)耳聾基因,常見(jiàn)的

13、耳聾致病基因：Sanger測(cè)序,罕見(jiàn)耳聾基因檢測(cè)：定向捕獲二代測(cè)序可行性分析：OtoSCOPE®芯片（54個(gè)已知耳聾基因，2010年，University of Iowa）79個(gè)已知耳聾基因的二代測(cè)序（本研究）,2010年二代測(cè)序首次應(yīng)用于已知耳聾基因檢測(cè),適宜的檢測(cè)技術(shù),罕見(jiàn)已知耳聾基因檢測(cè),,罕見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),,總樣本量：183例,經(jīng)濟(jì)高效的檢測(cè)方案,檢測(cè)方案（二步法）第一步：常見(jiàn)耳聾基因Sanger測(cè)序（所有樣本）

14、第二步：79個(gè)耳聾基因二代測(cè)序（排除常見(jiàn)耳聾基因致病樣本）,二步法優(yōu)點(diǎn)：節(jié)約二代測(cè)序樣本數(shù)量,罕見(jiàn)已知耳聾基因檢測(cè),,罕見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),79個(gè)已知耳聾基因病因構(gòu)成圖,常見(jiàn)耳聾基因突變：35.5%GJB2: 19.7%SLC26A4：12.0%MT-RNR1: 3.8%罕見(jiàn)耳聾基因突變：15.8%,罕見(jiàn)已知耳聾基因病因構(gòu)成：15.8%,罕見(jiàn)已知耳聾基因檢測(cè),,罕見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),罕見(jiàn)耳聾基因的異質(zhì)性強(qiáng),罕見(jiàn)基因突變分布圖,致病突

15、變廣泛分布于15個(gè)基因中,新發(fā)突變占絕大多數(shù),致病突變是否報(bào)道分布圖,Orphanet Journal of Rare Diseases 2013, 8:85,罕見(jiàn)已知耳聾基因檢測(cè),,罕見(jiàn)耳聾基因檢測(cè),新耳聾基因克隆與發(fā)現(xiàn),所有已知耳聾基因檢測(cè)后都為陰性 新耳聾基因致?。恳阎@基因非編碼區(qū)致?。恳阎@基因大片段缺失？……,,新耳聾基因克隆,,遺傳性耳聾家系連鎖分析,遺傳標(biāo)記,基因型分離,表型分離,基因型-

16、表型共分離,耳聾基因的定位克隆,,新耳聾基因克隆,外顯子捕獲/二代測(cè)序,二代測(cè)序,耳聾基因定向外顯子捕獲/測(cè)序平臺(tái)排除已知耳聾基因增加克隆新耳聾基因的把握,,,,新耳聾基因克隆,Genome-Wide Linkage Analysis,Performed in 9 affected and 9 unaffected (>35 yrs),,,,,,,,,,,,,,,,,,,新耳聾基因克隆,候選區(qū)域,,,,,,,,,,新耳聾基

17、因克隆,Genome-Wide Linkage Analysis,9 affected and 8 unaffected Illumina OmniZhongHua BeadChip (900,015 SNPs) Chr16p13 kgp1005458-kgp2546988 (2.1 Mb) Maxium LOD = 3.8 Overlapped with DFNB86 interval,,新耳聾基因克隆,Whole Exo

18、me Sequencing,3 affected and 2 unaffected,,,,,,,新耳聾基因克隆,Whole Exome Sequencing,Candidate variants: non-synonymous variants (missense, nonsense, splicing site, indels, etc) with allele frequencies ≤ 0.001,,II-3,III-9,III-

19、7,III-5,III-11,II-3, III-7, III-9: Affected III-5, III-11: Unaffected,,新耳聾基因克隆,Whole Exome Sequencing,Confirmed by Sanger sequencing in all family members,,,新耳聾基因克隆,Genome-Wide Linkage Analysis,9 affec

20、ted and 8 unaffected Illumina OmniZhongHua BeadChip (900,015 SNPs) Chr16p13 kgp1005458-kgp2546988 (2.1 Mb, 124 genes) Maxium LOD = 3.8 Overlapped with DFNB86 interval,,,,新耳聾基因克隆,The p.Ser178Leu Variant of TBC1D24,H

21、ighly conservative Not seen in 1000 normal hearing controls,,新耳聾基因克隆,Hum Mutat，2014, 35(7):814-818,TBC1D24,,新耳聾基因克隆,耳聾基因檢測(cè)技術(shù)：一代測(cè)序,DNA抽提 > PCR擴(kuò)增 > 擴(kuò)增片段測(cè)序 > 突變檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)：可覆蓋目標(biāo)基因全部編碼序列，適合特定目標(biāo)診斷,,總結(jié)-檢測(cè)技術(shù),高通量定點(diǎn)突變檢測(cè)技術(shù),耳聾