動物細(xì)胞融合與單克隆抗體的制備

1、雜種植株,篩選融合AB的原生質(zhì)體,,再生出細(xì)胞壁,脫分化,愈傷組織,,再分化,植物細(xì)胞的融合,植物組織培養(yǎng),植物細(xì)胞A,原生質(zhì)體B,原生質(zhì)體A,,,雜種細(xì)胞AB,,去 壁,去 壁,人工誘導(dǎo),方法？,促進(jìn)融合的方法？,融合完成的標(biāo)志,植物細(xì)胞B,植物體細(xì)胞雜交技術(shù)過程,原理？,原理？,動物細(xì)胞融合與單克隆抗體,一、動物細(xì)胞融合,1、動物融合的過程請同學(xué)們閱讀課本P52動物融合①.細(xì)胞融合的概念②.誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法

2、③.意義并用筆畫出來,2、動物細(xì)胞融合的概念,動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞形成一個細(xì)胞的過程,思考題,1、植物體細(xì)胞雜交時首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)胞壁？,酶解法，如纖維素酶或果膠酶,2、動物細(xì)胞融合時需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？,無需，因?yàn)閯游锛?xì)胞無細(xì)胞壁,3、植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？,離心、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法,4、動物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？,能 還

3、可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo),5、植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形成完整的雜種個體，動物細(xì)胞融合后能形成雜種動物個體嗎？,不能,不同DNA的兩個細(xì)胞,,滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合,,融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂,1、動物細(xì)胞融合過程,動物細(xì)胞融合,,,,,,,,雜種細(xì)胞,愈傷組織,雜種植株,,植物體細(xì)胞雜交,,去壁,,原生質(zhì)體融合,,植物組織培養(yǎng),4、原理,細(xì)胞膜的流動性,5、最有價值的應(yīng)用,制備單克隆抗體,3、過程,不同DNA

4、的兩個細(xì)胞,,滅活的病毒,PEG等,雜交細(xì)胞,細(xì)胞融合完成的標(biāo)志:細(xì)胞核融合成一個核,主要用于制備,單克隆抗體,獲得雜種植株,用途,物理、化學(xué)方法,（同左）,滅活的病毒,物理（離心、振動、電刺激）,化學(xué)（聚乙二醇）,誘導(dǎo)方法,使細(xì)胞分散后誘,導(dǎo)細(xì)胞融合,去除細(xì)胞壁后誘,導(dǎo)原生質(zhì)體融合,細(xì)胞融合的方法,細(xì)胞膜的流動性,細(xì)胞膜的流動性、,植物細(xì)胞全能性,原理,動物細(xì)胞融合,植物體細(xì)胞雜交,,,,,,,,,,,比較項(xiàng)目,,植物、動物細(xì)胞融合的

5、比較,,,1.能使動物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)方法是A．離心 B．滅活的病毒 C．電刺激 D．振動,,2.動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是A．克服遠(yuǎn)源雜交不親和 B．制備單克隆抗體C．培育新物種 D．生產(chǎn)雜種細(xì)胞,7、你推測一下動物細(xì)胞融合有哪些方面的應(yīng)用嗎？,思考題,利用動物細(xì)胞融合

6、技術(shù)誘導(dǎo)形成雜交瘤細(xì)胞,,8、在生產(chǎn)實(shí)際中雜交瘤細(xì)胞有怎樣的應(yīng)用？,生產(chǎn)單克隆抗體,請同學(xué)們閱讀課本P52,1.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？２、一個Ｂ淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌多種抗體嗎？３、一種抗原侵入機(jī)體之后，引起機(jī)體免疫反應(yīng)產(chǎn)生的抗體只有一種嗎？,二、單克隆抗體,每個Ｂ淋巴細(xì)胞只能分泌一種抗體，由一個Ｂ淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生的細(xì)胞群分泌的抗體化學(xué)成份是單一的。,漿細(xì)胞,一種,,,抗體不純,,４. 簡述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？,５、這種方

7、法獲得的抗體有什么缺陷？,6.如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？,體外培養(yǎng)單個Ｂ淋巴細(xì)胞，提取分泌的抗體,7.體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無限增殖嗎?,不能,怎樣解決這個問題？,設(shè)計方案：一個B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無限增殖,,雜交細(xì)胞,二、單克隆抗體,為什么用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？,思考：,因?yàn)锽淋巴細(xì)胞具有分泌特異性抗體的能力，而骨髓瘤細(xì)胞具有在體外培養(yǎng)條件下大量增殖的本領(lǐng)，所以由某種B淋巴細(xì)胞

8、和骨髓瘤細(xì)胞融合產(chǎn)生的雜交瘤細(xì)胞，能夠在體外大量繁殖，并且產(chǎn)生特定的單克隆抗體。,,,B淋巴細(xì)胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤細(xì)胞,培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞,,,,,融合,培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？ （只考慮兩兩融合）融合細(xì)胞幾種類型？,5種B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞--- B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞3種骨髓瘤細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞--- B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞,多種雜交細(xì)

9、胞,,,,,,在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng),專一抗體檢驗(yàn)陽性,,克隆上述雜交細(xì)胞,分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗(yàn)陽性細(xì)胞,,,,單克隆抗體,注射到小鼠體內(nèi),體外培養(yǎng),2、單克隆抗體的制備過程,第1次篩選目的：得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。,,第2次篩選目的：在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。,,該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能產(chǎn)生專一抗體又能無限增殖。,雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？,特異性強(qiáng)，靈敏度高,2.制備過程：,誘導(dǎo)其融

10、合的方法有哪些？,注射抗原的目的是什么,,大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法,融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞,兩次篩選的原因,2、單克隆抗體制備過程,B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞,誘導(dǎo)融合,B-B細(xì)胞,,B-瘤細(xì)胞,瘤-瘤細(xì)胞,,選擇培養(yǎng),雜交瘤細(xì)胞（ B-瘤細(xì)胞）,,克隆化培養(yǎng),抗體檢測,產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞,,體外培養(yǎng),單克隆抗體,課堂小結(jié),單克隆抗體制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞 工程技術(shù)手段？,動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),B淋巴細(xì)胞,骨髓

11、瘤細(xì)胞,【堂堂清】,1.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是________________________________,特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備,2.單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的原因是_________________________________,每一種B淋巴細(xì)胞只能分泌一種特異性抗體,3.產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是_______________ 產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞是__________,效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）,雜交瘤細(xì)胞,4.雜交瘤

12、細(xì)胞的特點(diǎn):_______________________________,既能無限增殖，又能分泌特異性抗體,5.首次篩選是為了獲得_____________ 第二次篩選時為了獲得_______________________________,雜交瘤細(xì)胞,既能無限增殖，又能分泌所需特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞,第一步：從一只小鼠體內(nèi)提取T淋巴細(xì)胞，然后與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合。第二步：再用普通培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在該培養(yǎng)基上，未融合的親

13、本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會死去。第三步：對上述經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞直接在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，這樣從細(xì)胞培養(yǎng)液中就可以提出破傷風(fēng)桿菌單克隆抗體。,實(shí)驗(yàn)評價,1、已注入過滅活破傷風(fēng)桿菌的小鼠,2、B淋巴細(xì)胞,3、選擇培養(yǎng)基,4、必須經(jīng)過專一抗體陽性檢驗(yàn),下面是某同學(xué)根據(jù)單克隆抗體技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。指出不足之處。,3.單克隆抗體的應(yīng)用：,①在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義,②在疾病診斷、治療和預(yù)

14、防方面，具有 特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。,③生物導(dǎo)彈,二、單克隆抗體,,4、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細(xì)胞融合的是 　A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞 B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞 D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞,,,5、單克隆抗

15、體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞。在這種培養(yǎng)基上不能存活、增殖的細(xì)胞是①B淋巴細(xì)胞 ②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A、① ② ③ ④ B、 ① ③ ⑤C、① ③ D、② ④,,6下圖是單克隆抗體制備過程示意圖，據(jù)圖回答：,（1）圖中A過程是從小鼠的脾臟中取得__________細(xì)胞，該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______

16、_____。從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）B過程是一個____________過程，該過程的進(jìn)行需要滅活的______或_____________的誘導(dǎo)。,免疫的B淋巴,特異性抗體,特定抗原,細(xì)胞融合,病毒,聚乙二醇,,7．右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。據(jù)圖回答：　?。?）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？　　。原因是　　 　

17、　 . 。?。?）圖中②為　　　過程，常用　　　　作為誘導(dǎo)劑。該細(xì)胞繼承了　 　 　，因此不僅能分泌　 　　，還能 　　 　　 。（3）該方案的目的是　　 。,不能,無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞.,細(xì)胞融合,滅活病毒,雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì),特異性抗體,在體

18、外培養(yǎng)條件下大量增殖,制備單克隆抗體,沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，,,7、下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。,動物細(xì)胞培養(yǎng),選擇,特異性強(qiáng),靈敏度高,滅活的病毒,在體外大量增殖,分泌特異性抗體,骨髓,造血干細(xì)胞,主動運(yùn)輸,（1）_______________技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。（2）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類，圖中HAT培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。（3）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是______________

19、__。（4）動物細(xì)胞融合除了采用植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合常用的誘導(dǎo)劑外，還可以采用________________。（5）選出的雜交瘤細(xì)胞既具備骨髓瘤細(xì)胞的_______________特點(diǎn)，又具備淋巴細(xì)胞的_______________特點(diǎn)。（6）淋巴細(xì)胞是由動物體_________中的______________細(xì)胞分化、發(fā)育而來。（7）雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是____________。,五種（B淋巴細(xì)