藥品生產(chǎn)清潔驗證全解

1、2024年3月10日星期日,清潔分析方法驗證 蘇芳,清潔驗證的背景：,FDA歷來的檢查重點：過去FDA 總是更注意檢查青霉素類與非青霉素類藥物之間的交叉污染、藥品與甾類物質(zhì)或激素之間的交叉污染問題。在過去二十年間，因?qū)嶋H或潛在的青霉素交叉污染問題已從市場上撤回了大量的藥品。 有一位幼兒教師，懷抱著一名2小時前注射過青霉素鈉的嬰兒，孩子的一泡尿撒在了幼兒教師的手臂上，1分鐘后該名幼兒教師呼吸困難

2、、面色蒼白、心慌氣短，不一會就呈現(xiàn)昏迷狀態(tài)，經(jīng)醫(yī)生診斷為青霉素過敏。,歐盟GMP關(guān)于清潔的要求,36.為確認清潔規(guī)程的效力，應(yīng)進行清潔驗證。應(yīng)根據(jù)所涉及的物料，合理的確認產(chǎn)品的殘留、清潔劑和微生物污染的限度標(biāo)準(zhǔn)。這個限度標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該是可以接受的，能夠被證實的。37.應(yīng)該使用經(jīng)驗證、檢出靈敏度高的檢驗方法來檢測殘留或污染物。每種分析方法或儀器的檢測靈敏度應(yīng)足以檢測出設(shè)定合格限度水平的殘留或污染物。,歐盟GMP關(guān)于清潔的要求,38.通常只有接

3、觸產(chǎn)品的設(shè)備表面的清潔規(guī)程需要驗證。某些場合下，還應(yīng)考慮不直接接觸產(chǎn)品的部分。應(yīng)驗證設(shè)備使用與清潔的間隔時間,以及已清潔設(shè)備可保留的時間（即清潔有效期），并通過驗證確定清洗的間隔時間和清潔的方法。39.對于相似產(chǎn)品和相似工藝而言，可從相似產(chǎn)品及工藝中，選擇一個具有代表性的產(chǎn)品和工藝進行清潔驗證?？梢圆捎谩白畈顥l件”的方法進行單獨的驗證試驗，在驗證中應(yīng)考慮關(guān)鍵因素（取樣部位、取樣方法、清洗劑等）,歐盟GMP關(guān)于清潔的要求,40.為證明方

4、法是經(jīng)過驗證的，通常應(yīng)在3個連續(xù)批上使用該清潔規(guī)程，并檢驗合格。42.如果實際產(chǎn)品是有毒物質(zhì)或有害物質(zhì)，在清潔驗證中，可以例外的采用物化性質(zhì)相似的無毒無害物質(zhì)來模擬。,FDA的要求：,在FDA的cGMP 211.67章節(jié) 中規(guī)定了設(shè)備清洗驗證的要求。建立書面標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），其中必須詳細規(guī)定設(shè)備各部件的清洗過程。 必須建立書面的清洗方法驗證通則。 清洗方法驗證通則應(yīng)規(guī)定執(zhí)行驗證的負責(zé)人、批準(zhǔn)驗證工作的負責(zé)人、驗證標(biāo)準(zhǔn)（合

5、格標(biāo)準(zhǔn)）、再驗證的時間。 對各生產(chǎn)系統(tǒng)或各設(shè)備部件進行清洗驗證之前，應(yīng)制定專一特定的書面驗證計劃，其中應(yīng)規(guī)定取樣規(guī)程、分析方法（包括分析方法的靈敏度）。,內(nèi)容介紹,1.標(biāo)記化合物的選擇及限度計算2.清潔方法的開發(fā)和設(shè)計3.清潔分析方法（HPLC）的驗證4.HPLC法與TOC法比較,一、標(biāo)記化合物的選擇,一般藥品都由活性成分和輔料組成。對于接觸多個產(chǎn)品的共用設(shè)備，所有這些殘留物都是必須清潔干凈的，在清潔驗證中不必為所有殘留物都制定

6、限度標(biāo)準(zhǔn)并一一檢測，因為這是不切實際且沒有必要的。在一定的意義上，清潔的過程是個溶解的過程，因此，通常的做法是從各組分中確定最難清潔(溶解)的物質(zhì)，以此作為參照物質(zhì)。通常，相對與輔料，人們最更關(guān)注活性成分的殘留，因為它可能直接影響下批產(chǎn)品的質(zhì)量、療效和安全性。,一、標(biāo)記化合物的選擇（續(xù)）,毒性在清洗溶劑中的溶解度清洗問題如：對設(shè)備表面材質(zhì)有一定的附著力 包含色料、芳香劑或矯味劑的產(chǎn)品 設(shè)備的使用率（生產(chǎn)頻率高的產(chǎn)品相應(yīng)的

7、清洗頻率也高）清洗過程中如果使用清洗劑，則其殘留物也應(yīng)視為標(biāo)記物,一、標(biāo)記化合物的選擇（續(xù)）,目標(biāo)化合物選擇：,A D,化學(xué)殘留限度計算：,① 濃度限度：十萬分之一（10ppm） 在下一產(chǎn)品中的殘留物數(shù)量級別應(yīng)不超過十萬分之一（10ppm） 設(shè)下批產(chǎn)品的生產(chǎn)批量為B(kg)，因殘留物濃度最高為10×10－6，即10mg／kg，則殘留物總量最大為B×10×10－6＝10B(mg)；

8、單位面積殘留物的限度為殘留物總量除以測量的與產(chǎn)品接觸的內(nèi)表面積，設(shè)設(shè)備總內(nèi)表面積為SA(cm2)，則表面殘留物限度L 為10B／SA(mg／cm2)。,化學(xué)殘留限度計算：（續(xù)）,② 千分之一殘留限度的計算MTDa = 清洗前產(chǎn)品最小每日給藥劑量中的活性成分含量；Nb = 清洗后產(chǎn)品的批量；MDDb = 清洗后產(chǎn)品的最大日給藥劑量的活性成分含量；Sb = 清洗后產(chǎn)品活性成分含量的百分比(%w/w)。數(shù)據(jù)1/1000來源：一

9、般認為藥物的十分之一處方劑量是無效的。,二、清潔方法的開發(fā)和設(shè)計：清潔方式選擇,通常清潔方法分為:手工清潔（Manual Cleaning）在線清潔（Cleaning In Place）在線清潔的特點：1. 設(shè)備、容器、管道能夠自動進行清洗；2. 對容器采用噴林法清潔，對管道采用壓力法清潔；3. 極少的手工操作，重復(fù)性高。,二、清潔方法的開發(fā)和設(shè)計:清潔劑的選擇,1. 清潔劑應(yīng)能有效溶解殘留物，不腐蝕設(shè)備，且本身易被清除。

10、2. 人用藥品注冊技術(shù)要求國際標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)會(ICH)在“殘留溶劑指南”中將溶劑分為3個級別，對其使用和殘留限度有明確的要求。3. 隨著環(huán)境保護標(biāo)準(zhǔn)的提高，還應(yīng)要求清潔劑對環(huán)境盡量無害或可被無害化處理。4. 滿足以上要求的前提下應(yīng)盡量廉價。,二、清潔方法的開發(fā)和設(shè)計:清潔劑的選擇（續(xù)）,根據(jù)這些標(biāo)準(zhǔn)，對于水溶性殘留物，水是首選的清潔劑。不同批號的清潔劑應(yīng)當(dāng)有足夠的質(zhì)量穩(wěn)定性。因此不宜采用一般家用清潔劑，因其成分復(fù)雜、質(zhì)量波動較大且供應(yīng)

11、商不公布詳細組份。因此，應(yīng)盡量選擇組份簡單、成分確切的清潔劑。根據(jù)殘留物和設(shè)備的性質(zhì)，企業(yè)還可自行配制成分簡單效果確切的清潔劑，如一定濃度的酸、堿溶液等。企業(yè)應(yīng)有足夠靈敏的方法檢測清潔劑的殘留情況，并有能力回收或?qū)U液進行無害化處理。,取樣方法和取樣點的確認：,通常設(shè)備的取樣清潔驗證中如何確定合適取樣方法和取樣點是驗證方案的關(guān)鍵內(nèi)容之一，必須由合適的理由來確認取樣點，此取樣點應(yīng)能夠代表設(shè)備的“最臟點”。（1） 取樣方法的選擇 直

12、接表面擦拭 淋洗液沖洗 浸泡液取樣,取樣方法和取樣點的確認：,擦拭取樣優(yōu)點：是能對最難清潔部位直接取樣，通過選擇適當(dāng)?shù)牟潦萌軇?、擦拭工具和擦拭方法，可將清洗過程中未溶解的，已“干結(jié)”在設(shè)備表面或溶解度很小的物質(zhì)擦拭下來。檢驗的結(jié)果能直接反映出各取樣點的清潔狀況。 擦拭取樣缺點：是很多情況下須拆卸設(shè)備后方能接觸到取樣部位，對取樣工具、溶劑、取樣人員的操作等都有一定的要求。,取樣方法和取樣點的確認：,淋洗取樣法

13、優(yōu)點：是取樣面大，對不便拆卸或不宜經(jīng)常拆卸的設(shè)備也能取樣。因此其適用于擦拭取樣不易接觸到的表面，尤其適用于設(shè)備表面平坦、管道多且長的的生產(chǎn)設(shè)備。 淋洗水取樣缺點：溶解與流體力學(xué)原理，當(dāng)溶劑不能在設(shè)備表面形成湍流進而有效溶解殘留物時，或者殘留物不溶于水或“干結(jié)”在設(shè)備表面時，淋洗水就難以反映真實的情況。,取樣方法和取樣點的確認：,（2） 取樣點的確認 通常不可能擦拭設(shè)備的全部表面，因此應(yīng)該選擇設(shè)備的最差

14、區(qū)域作為取樣點。這些區(qū)域應(yīng)在清潔難度和殘留水平方面代表著對清潔規(guī)程最大程度的挑戰(zhàn)，例如料斗的底部、槳拌槳槳葉底部和閥門的周圍。,三、清洗分析方法驗證的內(nèi)容：,專屬性線性范圍準(zhǔn)確度精密度（重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性）檢測限（LOD）和定量限（LOQ）藥品溶液的穩(wěn)定性,專屬性： 通常在進行清潔分析時，即使活性成分的樣品（如：取樣棉簽、淋洗溶液）中的含量也很低，所以在進行專屬性驗證時無需考慮正常產(chǎn)品中的雜質(zhì)

15、，降解產(chǎn)物的影響，只需考慮輔料及空白溶劑的影響。,專屬性的試驗方法：,1.預(yù)先按處方比例配制足夠量的輔料混合物，研磨均勻。2.按照試驗方法配制一定濃度（濃度來自于：標(biāo)記化合物的理論限度濃度）的標(biāo)準(zhǔn)溶液。3.精密稱量同標(biāo)準(zhǔn)溶液中所用標(biāo)準(zhǔn)品成比例的輔料混合物，按照標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制方法配制。過濾后使用。,專屬性的接受標(biāo)準(zhǔn)：,1.應(yīng)當(dāng)證明潛在的干擾成分不會對方法的性能產(chǎn)生副作用。對于色譜檢測方法，要求證實雜質(zhì)之間、雜質(zhì)與主峰之間的分離度≥1

16、.0。2.空白對照應(yīng)無干擾。,線性與范圍： 線性是定量測定的基礎(chǔ)，所以定量清洗分析方法需要進行線性驗證而定性清洗分析方法無法進行線性驗證。 可用一貯備液經(jīng)精密稀釋或分別精密稱樣，制備一系列的供試品進行測定，至少制備5個濃度（通常選取50%、80%、100%、120%和150%），另外需要將定量限加入到線性中。,精密度： 1.重復(fù)性 重復(fù)性系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內(nèi)，由同一分析人員測定所得結(jié)果的接

17、近程度。,精密度：重復(fù)性的評價： 在方法規(guī)定的線性范圍內(nèi)至少測定9次（如3個濃度級別80%，100%和120%，或者30%，50%和100%；每個濃度級別測定3次）或者在100%的試驗濃度，至少測定6次?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：定量清洗分析方法驗證時，活性成分的RSD≤10%。,2.中間精密度：系指同一實驗室不同日期、不同儀器、不同分析人員對同一樣品、采用同一方法處理樣品所得結(jié)果之間的接近程度。 驗證方法：同一樣品每位分析人員準(zhǔn)備6份

18、進樣測量，計算兩人之間的平均值的差異。 可接受限度：平行六份樣品的RSD≤10%，兩人之間的平均值之差的相對值≤10%。,準(zhǔn)確度試驗：,棉簽取樣回收率試驗淋洗取樣回收率試驗浸泡法取樣回收率試驗,清洗回收率：棉簽取樣方法驗證,取樣棉簽種類、規(guī)格、品牌等；溶解用溶劑；取樣人員的操作；樣品的溶出。,棉簽取樣方法清洗回收率,準(zhǔn)備一塊與設(shè)備表面材質(zhì)相同的板材，如平整光潔的316L不銹鋼板；在鋼板上劃出100mm×100

19、mm的區(qū)域；將5倍限度量的的待檢測物溶液，定量裝入校驗的微量注射器；將其溶液盡量均勻的涂布100mm×100mm的區(qū)域內(nèi)；自然干燥或用電吹風(fēng)溫和的吹干不銹鋼板；,棉簽取樣方法清洗回收率,用選的的擦拭溶劑潤濕擦拭棉簽，按下圖所示進行擦拭取樣；,第一步,第二步,棉簽取樣清洗回收率,重復(fù)以上規(guī)程3次；將擦拭棉簽分別放入棉簽管中，加入預(yù)定的溶劑5ml，超聲；依法分析，計算回收率和回收率的RSD,棉簽取樣方法清洗回收率,總結(jié)：

20、 取樣過程需經(jīng)過驗證，通過回收率試驗驗證取樣過程的回收率和檢驗方法回收率結(jié)合進行。接受標(biāo)準(zhǔn)： 總回收率一般（企業(yè)可以根據(jù)實際情況確定）不低于70%，多次取樣回收率的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于20%,淋洗法清洗回收率：淋洗溶劑選擇,溶解度；同設(shè)備內(nèi)表面的相容性；易清除性；毒性；環(huán)境的危害性；獲取的難易性。,清洗回收率——淋洗法,淋洗溶劑或淋洗水的淋洗速度選擇：,淋洗法清洗回收率試驗方法：,選擇同生產(chǎn)設(shè)備材質(zhì)相同的平板，劃

21、出10cm*10cm區(qū)域，在該區(qū)域內(nèi)均勻涂抹一定量（取決于分析方法的測量范圍的下限乘以清洗所有溶液的體積）的標(biāo)記化合物，待干燥后，使用一定體積的淋洗溶劑，采用一定速度沖洗平板，收集全部淋洗液，如有必要可以重復(fù)清洗過程。待沖洗完成后，吸取一定體積的淋洗液進行測試，并計算回收率。,清洗回收率——淋洗法,接受標(biāo)準(zhǔn)：回收率通常應(yīng)不低于95%； 外觀檢查即清洗后的淋洗溶液樣品同淋洗前的淋洗液做視覺檢查，確定是否有顏色差異和異物存在；如果有

22、上述現(xiàn)象發(fā)生，可直接判斷樣品不合格。注意：淋洗法樣品可對沖洗液直接檢測，也可對稀釋/濃縮后檢測。,檢測限和定量限：,檢測限系指在確定的試驗條件下，試樣中的被測物能被檢查的最小量；定量限系指在確定的試驗條件下，試樣中被測物能被準(zhǔn)確測定的最小量，其檢測結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。,檢測限和定量限：,1.信噪比法：該方法適用于出現(xiàn)噪音的分析方法。 性噪比的測定時通過比較含已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測試信號，確定被分析物

23、可被確切的檢測的最小濃度，典型的性噪比為3:1；對于定量限典型的信噪比為10:1。,檢測限和定量限：,2.根據(jù)相應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率檢測限：LOD=3.3δ/S+空白值定量限：LOQ=10δ/S+空白值其中：δ為響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差；S為校正曲線的斜率；S可從被分析物的校正曲線來估算；δ的值可由多種途徑估算，如：,1.測定背景10次以上，求出標(biāo)準(zhǔn)偏差δ。2.將δ乘以3.3倍。3.在工作曲線上求出3.3 δ相對應(yīng)的濃度X。該