抑癌基因menin調(diào)控Pax2的分子機(jī)制研究.pdf

1、以染色質(zhì)共價(jià)修飾為主要標(biāo)志的表觀遺傳調(diào)控作為整合細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境因素與基因組遺傳信息的媒介，直接調(diào)控基因表達(dá)，決定細(xì)胞增殖、分化與功能特化，在生命活動(dòng)中起到不可或缺的作用。MEN1基因(小鼠為Menl)是多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤Ⅰ型綜合征(Multiple endocrine neoplasia type1，MEN1)的關(guān)鍵致病基因之一，其編碼蛋白menin為多組織表達(dá)性核蛋白。menin調(diào)控的組蛋白甲基化修飾與靶基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控、疾病發(fā)生的關(guān)系是目前

2、這一領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。近年來(lái)的研究結(jié)果表明，menin通過(guò)與MLL等組蛋白修飾酶系統(tǒng)相互作用，影響組蛋白H3K4甲基化修飾和染色質(zhì)結(jié)構(gòu)等表觀遺傳學(xué)機(jī)制而調(diào)節(jié)關(guān)鍵靶基因表達(dá)，廣泛參與細(xì)胞周期，細(xì)胞增殖，細(xì)胞遷移，細(xì)胞凋亡以及DNA損傷修復(fù)等過(guò)程。Pax2是調(diào)節(jié)胚胎腎臟發(fā)育的重要基因，在調(diào)節(jié)腎臟間質(zhì)一上皮轉(zhuǎn)化的過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，并且具有促細(xì)胞增殖的功能，在多種腫瘤的發(fā)生中扮演重要角色?；蛐酒Y(jié)果顯示，Menl-/-MEF細(xì)胞中Pax2表達(dá)

3、量明顯上調(diào)，提示menin調(diào)控的Pax2表達(dá)可能是實(shí)現(xiàn)menin生物學(xué)功能的主要信號(hào)通路之一，但其機(jī)制尚不清楚。在肺腺癌中，menin能夠影響H3K27的組蛋白修飾從而抑制PTN的表達(dá)。然而，menin是否通過(guò)影響PcG家族蛋白介導(dǎo)的H3K27的甲基化修飾而抑制Pax2，尚不清楚。
　　 本研究以Menl+/+和Menl-/-MEF細(xì)胞為研究模型，采用染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)、免疫共沉淀(IP)等分子生物學(xué)技術(shù)探討menin

4、對(duì)Pax2的表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制。通過(guò)ChIP方法，我們發(fā)現(xiàn)menin能夠影響Pax2啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3K27的三甲基化水平但并不與Pax2的基因位點(diǎn)直接結(jié)合；進(jìn)一步的研究結(jié)果顯示，menin能上調(diào)WT1的表達(dá)，并且WT1能夠影響Pax2啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3K27的三甲基化水平；我們通過(guò)IP證實(shí)了WT1能與DNMT1及PcG家族蛋白EZH2、SU212相互作用。以上結(jié)果表明：menin上調(diào)WT1的表達(dá)，WT1招募PcG家族蛋白以及DNA甲基