顱內(nèi)感染的實驗室診斷技術(shù)新進展

1、顱內(nèi)感染的實驗室診斷技術(shù)新進展,,1.1 巢式PCR （Nested PCR）本法需設(shè)計引物兩套，對腦脊液進行兩步法基因擴增，檢測其中含量低的病原體。巢式PCR對革蘭染色、培養(yǎng)或抗原檢測陰性或不確定時更有檢測價值。,,,Takahashi等用巢式PCR檢測腦脊液中含量甚微的結(jié)核分枝桿菌，較傳統(tǒng)的PCR方法敏感度高出1000～10000倍。Failane等對疑有BCNI的兒童腦脊液應(yīng)用半巢式PCR檢測腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌和

2、流感嗜血桿菌，陽性和陰性預(yù)測值均為90%以上。,Takahashi T, Nakayama T, Tamura M, et al. Nested polymerose chain reaction for assessing the clinical course of tuberculous. meningitis[J]Neurology,2005,64(10):1789-1793. Failane L, Wagner M, Che

3、sky M, et al. Simultaneous detection of nisseria meningitidis, haemophihts influenzae and Streptococcussp. by polymerase chain reaction for the diagnosis of bacterial meningitis[J]. Arq Neuropsiquiatr,2005,63(4):920-924.

4、,,1.2 熒光定量PCR （Real-Time Quantitative PCR RT-PCR）RT-PCR是常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光探針，具有準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好等特點，已廣泛用于基因表達、病原體檢測等領(lǐng)域。應(yīng)用RT-PCR檢測細菌性腦膜炎的病原菌，陽性檢出率(39%)顯著高于腦脊液培養(yǎng)(10%)。,Brajon G,Mandas D,Liciardi M,et a1.Development and field testin

5、g of a real--time PCR assay for caprine arthritis-encephaliis-Virus(CAEV)EJ3[J].Open Virol J,2012,6(1):82-90． Chiba N, Murayama SY, Morozumi M,et al. Rapid detection of eight causative pathogens for the diagnosis of bac

6、terial meningitis by realtime PCR[J]. J Infect Chemother,2009,15(2):92-98.,,應(yīng)用RT-PCR檢測腦脊液中肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌和腦膜炎奈瑟菌敏感性和特異性分別達95.7%和94.3%，且不受抗菌藥物應(yīng)用影響。研究表明，RT-PCR的檢測周期平均比傳統(tǒng)PCR短24小時，有助于快速診斷，縮短患者住院時間并減少住院費用。,Wu HM, Cordeiro SM,

7、Harcourt BH, et al. Accuracy of real-time PCR, Gram stain and culture for Streptococcus pnemoniae, Neisseria meningitis and Haemoplilus influenzae meningitis diagnosis[J]. BMC infections Diseases,2013,13(4):26-35. Dahee

8、Jin, MD, Tae Hoon Heo, MD, Jung Hye Byeon. Analysis of clinical information and reversetranscriptase-polymerase chain reaction for early diagnosis of enteroviral meningitis[J]. Korean J Pediatr 2015;58(11):446-450.,,1.3

9、 基于16SrRNA基因序列分析技術(shù)16SrRNA基因核苷酸序列具有高度保守性，存在于所有細菌的染色體基因組中，其在保守區(qū)之間有9～10個變異區(qū)，利用16SrRNA可變區(qū)與恒定區(qū)的特性，設(shè)計細菌通用引物，能對臨床分離的任何病原菌進行準(zhǔn)確鑒定和定位及不同種屬細菌的分類，較傳統(tǒng)的細菌培養(yǎng)有更高敏感性。,,應(yīng)用16SrRNA基因擴增技術(shù)設(shè)計快速檢測顱內(nèi)感染常見病原菌的檢測方法，能準(zhǔn)確、快速且高效地檢測腦脊液中病原菌。高通量測序技術(shù)與16

10、SrRNA基因檢測相結(jié)合，可以大幅度提高病原體檢測速度并降低檢測成本。,Ali Reza Moayedi, Abdolazim Nejatizadeh, Maryam Mohammadian. Accuracy of universal polymerase chain reaction (PCR) for detection of bacterial meningitis among suspected patients[J]. El

11、ectronic Physician, 2015, 12: 1609-1612. Aicui Liu,Chao Wang, Zhijuan Liang.High-throughput sequencing of 16S rDNA amplicons characterizes bacterial composition in cerebrospinal fluid samples from patients with purulent

12、 meningitis[J]. Drug Design, Development and Therapy 2015:9 4417–4429,,1.4 基因芯片檢測技術(shù)：基因芯片技術(shù)是一種快速、高效、高通量的核酸分析技術(shù)，已廣泛用于基因檢測、藥物或耐藥基因的篩選、疾病相關(guān)基因的診斷、病原微生物感染的鑒定等領(lǐng)域。,,侯曉霖等通過NCBI數(shù)據(jù)庫檢索，篩選了包括腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、表皮葡萄球

13、菌及其他凝固酶陰性葡萄球菌等化膿性腦膜炎常見細菌的多條16SrRNA序列特異性探針（覆蓋腦膜炎常見病原菌90%的亞種），并根據(jù)臨床流行情況變化進行探針增減來滿足臨床需求。,侯曉霖, 梁志娟, 王振海. 化膿性腦膜炎腦脊液常見病原菌基因芯片的構(gòu)建[J]. 中國醫(yī)科大學(xué)報,2013,42(1):14-18.,,劉志忠等應(yīng)用基因芯片法檢測臨床腦脊液感染常見的10個種（屬）病原菌，包括金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌

14、、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、陰溝腸桿菌,與傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)比較符合率為97.0%，證實了芯片診斷技術(shù)篩查腦脊液病原菌的可行性，具有簡便、快速、準(zhǔn)確和高通量等優(yōu)點，對臨床樣本檢測及流行病學(xué)調(diào)查有重要意義。,劉志忠, 張艷, 石廣志. 基因芯片法檢測腦脊液病原菌的臨床應(yīng)用[J/CD]. 中華實驗和臨床感染病雜志:電子版,2013,6(3):210-213.,,,2.1 生物化學(xué)標(biāo)志物2.1.1 乳酸(Lactic Acid)腦脊液乳酸是腦

15、組織能量代謝的底物，是鑒別細菌性及病毒性顱內(nèi)感染常用的生化標(biāo)志物之一，細菌性感染時其含量升高，病毒性感染時無顯著改變。,Mekitarian Filho E,Horita SM,Gilio AE,et a1.Cerebrospinal fluid lactate level as a diagnostic biomarker for bacterial meningitis in children[J].hat J Emerg Med,

16、2014,7:14. Morichi S, Kasshiwagi Y, Takekuma K, et al. Expression of brainderived neurotrophic factor (BDNF) in cerespinal fluid and plasmaof children with meningitis and encephslitis/enephalopathy[J]. Int J Neurosci,2

17、013,123(1):17-23.,,Sakushima等對有關(guān)腦脊液乳酸檢測在細菌性顱內(nèi)感染診斷價值的33個研究進行薈萃分析發(fā)現(xiàn)，腦脊液乳酸含量升高診斷細菌性顱內(nèi)感染的合并敏感性為93%，特異性為96%，當(dāng)腦脊液乳酸>35mg/dL時,診斷的特異性可高達99%。,Sakushima K,Hayashino Y,Kawaguchi T,et a1.Diagnostic accuracy of cerebrospinal fluid

18、 lactate for differentiating bacterial meningitis from aseptic meningitis:a meta-analysis[J].J Infect,2011,62(4):255-262．,,2.1.2 尿酸(Uric Acid，UA) 腦脊液中的UA是由腦細胞中核酸轉(zhuǎn)化而來的，因此腦脊液UA含量可作為腦細胞損傷的指標(biāo)。發(fā)生顱內(nèi)感染時，腦脊液UA含量顯著增高(>40μmo

19、l/L)，主要是由細菌感染致使腦細胞損傷、破壞，自身代謝增強所致，同時也可能是由于炎癥刺激使血腦屏障通透性增高，UA移行入腦脊液，使腦脊液中的UA增高。,劉曉華.腦脊液中尿酸的測定及其在兒童病毒性腦炎中的意義[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2008, 29(8): 944 ．,,2.1.3 一氧化氮（NO）各種傷害性刺激均可誘發(fā)腦內(nèi)各區(qū)NO含量明顯升高，顱內(nèi)感染患者腦脊液NO含量均高于正常(>20mol/L)，但就細菌或病毒感染

20、而言差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)NO升高幅度與腦損傷程度有關(guān)，與感染病因無關(guān)，N0含量測定有助于腦脊液常規(guī)、生化正常的顱內(nèi)感染的診斷。,,2.1.4 臭氧（Reactive Oxygen Species ）細菌性腦膜炎患者CSF中臭氧含量明顯高于非腦膜炎患者，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。便捷的臭氧檢測方式是目前主要的研究方向。,Anne-Claire Lukaszewicz1, Valérie Faivre1,

21、Hélène Bout. Multicenter Testing of the Rapid Quantification of Radical Oxygen Species in Cerebrospinal Fluid to Diagnose Bacterial Meningitis[J]. Journal ,2015,May,26.,2.2 腦脊液蛋白,,細菌性顱內(nèi)感染發(fā)生時，腦脊液中上述各種蛋白的含量，除胱抑素C

22、外均較病毒性顱內(nèi)感染時升高，而腦脊液胱抑素C水平則以病毒性顱內(nèi)感染升高顯著。腦脊液中新型蛋白含量的測定因不受抗生素使用的干擾，為顱內(nèi)感染病原菌的鑒別診斷提供了新的方向。,Jesse S,Steinacker P,Lehnert S,et a1.A proteomic approach for the diagnosis ofbacterial meningitis[J].PLoS One,2010,5(4):e10079． Tsai

23、HC,Shi MH,Lee SS,et a1.Expression of matrix metalloproteinases and their tissue inhibitors in the serum and cerebrospinal fluid ofpatients with meningitis[J]Clin Microbiol Infect,2011,17(5):780-784． 王艷,王谷聲,周世俊.血清與腦脊液降鈣素

24、原檢測在兒童中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的應(yīng)用[J]右江醫(yī)學(xué),2012,40(3)：347-348． 張麗琴.腦脊液免疫球蛋白、乳酸脫氫酶及腺苷脫氨酶檢測在成人顱內(nèi)感染鑒別診斷中的臨床意義[J]中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2012,22(8):1752-1754．,,2.2.1 降鈣素原 （Procalcitonin，PCT）PCT是人類降鈣素(calcitonin)的前體物質(zhì)，1993年由Assicot等首次報道其可作為細菌感染的早期標(biāo)志

25、物，2001年國際膿毒癥會議把PCT作為膿毒癥診斷指標(biāo)之一。與CRP、WBC計數(shù)、中性粒細胞比例不同，在某些自身免疫性疾病(如類風(fēng)濕病)，PCT無明顯增高(一般小于0.01ng/mL)。,,Jereb等發(fā)現(xiàn)若以腦脊液PCT水平>0.5ng/mL為閾值，其對細菌性腦膜炎和病毒性腦膜腦炎的陽性預(yù)測值分別為100%和74%。還有學(xué)者研究認(rèn)為血清PCT>0.05ng/mL是診斷細菌性腦膜炎的指標(biāo)，而局灶性感染和病毒性腦膜炎患

26、者血清PCT水平一般不會高于此值。,Jereb M,Kotar T,Jurea T,et a1.Usefulness of procalcitonin for diagnosis of infective endocantifis[J].Intern Emerg Med,2009,4(3):221-226． 馮輝斌,周青山.促炎性細胞因子及降鈣素原在顱內(nèi)感染性質(zhì)鑒別中的應(yīng)用價值[J].實用臨床醫(yī)藥雜志，2013,17(13):17-1

27、9．,,Alain Viallon,Elisabeth Botelho-Nevers,Fabrice Zeni. Clinical decision rules for acute bacterial meningitis: current insights[J]. Open Access Emergency Medicine 2016:8 7–16,,一項來自于28項研究涵蓋2058個患者薈萃研究顯示，腦脊液PCT診斷細菌性腦膜炎的敏

28、感度和特性度分別為80%和86%。研究認(rèn)為，腦脊液PCT較腦脊液白細胞計數(shù)誤診率低，較血清PCT敏感性高。,Jens Vikse, Brandon Michael Henry ,Joyeeta Roy. The role of serum procalcitonin in the diagnosis of bacterial meningitis in adults: a systematic review and meta-ana

29、lysis[J]. International Journal of Infectious Diseases 2015(38): 68–76. Ting-Ting Wei, Zhi-De Hu, Bao-Dong Qin. Diagnostic Accuracy ofProcalcitonin in Bacterial Meningitis Versus Nonbacterial Meningitis[J]. Medicine,201

30、6, (11):e3079.,,2.2.2 C-反應(yīng)蛋白 （C-reactive protein，CRP）CRP是人體被細菌感染或者創(chuàng)傷后反應(yīng)最為敏感的一種急性時相蛋白?？梢酝ㄟ^免疫熒光法進行定量檢測，它是反映細胞和組織損傷的一種非特異性指標(biāo)，正常情況下僅少量存在于人體體液中。,Mc Carthy M,Rosengart A,Schuetz AN,et al. Mold infections of the central

31、nervous. system[J]. N Engl J Med，2014; 371( 2) : 150-60.,,CRP升高可見于中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥患者的腦脊液中并在恢復(fù)期消失?；撔曰蚪Y(jié)核性腦膜炎時，腦脊液、血清CRP水平均明顯增高；病毒性腦膜炎時CRP升高僅見于腦脊液中，而血清中并不增高。,Malla KK,Malla T,Rao KS,et a1.Is cerebrospinal fluid C-reactive protein

32、a better tool than blood C-reactive protein in laboratory diagnosis of meningitis in children [J]?Sultan Qaboos Univ Med J,2013,13：93-99． 劉春虹,杜彥輝.中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染患者腦脊液IFN-γ、hCRP、NSE的變化及臨床意義[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志,2013,35(6):485-487．,,2.2.3

33、 神經(jīng)元特異性烯醇化酶 （Neuronspecific Enolase NSE）NSE存在于腦神經(jīng)元胞質(zhì)中，腦損傷時，神經(jīng)細胞崩解，血腦屏障破壞，NSE釋放入腦脊液中，使其濃度升高，是神經(jīng)元損害的敏感性標(biāo)志物。CNSI可造成不同程度腦實質(zhì)損傷，使腦脊液中NSE濃度增高，NSE升高可直接反應(yīng)腦損害的存在。,,病毒性腦炎病毒依靠細胞的胞飲作用穿透神經(jīng)元細胞，造成對神經(jīng)元的直接侵犯，胞釋放NSE，因此病腦組NSE升高最為明

34、顯。結(jié)腦患者可導(dǎo)致腦梗死、腦水腫，可加重神經(jīng)元損傷。所以NSE升高也比較明顯?；X組的病變主要在腦膜，腦實質(zhì)損害相對較輕。,Libbey JE,Fujinami RS. Adaptive immune response to viral infections in the central nervous system[J] . Handb Clin Neurol,2014; 123 ( 3 ) :225-47.,,2.2.4

35、膽堿酯酶 （Cholinesterase，CHE）顱內(nèi)感染時，由于血腦屏障被破壞，血漿中大分子CHE可能進入腦脊液中，從而使其CHE含量增加。顱內(nèi)感染時，腦組織中的CHE可能被釋放進入腦脊液中，從而使其在腦脊液中水平升高。,,細菌性感染時CHE的上升幅度比病毒性感染更明顯，可能是由于細菌性感染對血腦屏障的破壞更明顯，血漿中CHE更易透過從而進入腦脊液所致。不同病毒對腦脊液CHE的活性影響不同，在已知的幾種病毒中，柯薩奇

36、B組病毒(CVB)對CHE活性的影響最大。,瞿少剛,張秀萍.病毒性腦膜炎、腦炎患兒的病原分析及部分生化指標(biāo)變化的l臨床意義[J]..現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2006,22(6):798-800． 張秀萍,瞿少剛,章曉聯(lián),等.病毒性腦膜炎、腦炎腦脊液膽堿酯酶活性與血清病毒抗體的關(guān)系[J].華中醫(yī)學(xué)雜志,2004,28(2):107-108．,,2.2.5 白細胞酯酶 （Leukocyte Esterase，LET）LET是細胞內(nèi)含有的

37、一種特異性酶類，這種酶類只在中性粒細胞內(nèi)存在。一些學(xué)者將尿液分析的白細胞酯酶試紙條用于腦脊液的細菌感染快速診斷。有資料表明，腦脊液中LET的檢出與細菌培養(yǎng)陽性、潘氏試驗陽性、白細胞總數(shù)和蛋白質(zhì)升高以及葡萄糖降低之間存在統(tǒng)計學(xué)上的相關(guān)性。,劉仁淳,肖正勤,盧森廳.白細胞酯酶檢測在腦脊液細菌感染快速診斷中的應(yīng)用[J]. 廣東醫(yī)學(xué), 2008, 29(2): 277-278．,,2.2.6 基質(zhì)金屬蛋白酶 （Matrix

38、Metalloproteinase MMPs）MMPs是一組結(jié)構(gòu)與功能同源的鋅離子依賴性中性蛋白酶超基因家族，可由體內(nèi)中性粒細胞，巨噬單核細胞及血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病中，MMP-9參與多種病理生理活動，可協(xié)同降解多種細胞外基質(zhì)（ECM）成分，促進炎癥性浸潤的發(fā)生，破壞血腦屏障（BBB）。,Savarin C, Bergmann CC, Hinton DR, Stohlman SA. MMP-independent&

39、#160;role of TIMP-1 at the blood brain barrier during viral encephalomyelitis[J].ASN Neuro. 2013 Nov 26;5(5):e00127.,,MMP-9在化膿性腦膜炎腦脊液中水平增高表達增強,腦脊液中MMP-9的水平與腦炎的嚴(yán)重程度具有很好的正性相關(guān)，這對病情的判斷及預(yù)后有具有重要的評估意義。抑制MMP-9的活性對治療病毒性腦炎有

40、輔助作用。目前認(rèn)為TIMPs是最重要的抑制物，但這一新途徑由于技術(shù)的限制還有待探索。,Irmeli Roine, Tuula Pelkonen, Anneli Lauhio. Changes in MMP-9 and TIMP-1 Concentrations in Cerebrospinal Fluid after 1 Week of Treatment of Childhood Bacterial Meningitis[J]. J

41、Clin Microbiol ,2015(53):2340 –2342 Tsai HC,Shi MH,Lee SS,et a1.Expression of matrix metaUopmteinases and their tissue inhibitors in the serum and cerebrospinal fluid of patients with meningitis[J].Clin Miembiol Infect,

42、2011,17:780-784．,,2.2.7 腺苷脫氨酶 （Adenosine Aeaminase ADA）ADA是腺嘌呤核苷代謝中的重要酶類．該酶的活性與淋巴細胞激活相關(guān)．特殊病原菌感染如結(jié)核桿菌感染可激活淋巴細胞，引起ADA增高。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)．細菌性顱內(nèi)感染發(fā)生時，腦脊液中ADA升高以結(jié)核性腦膜炎為多，化膿性腦膜炎升高次之。,Karsen H,Koruk ST,Karahocagil MK,et a1.Co

43、mparative analysis of cerebrospinal fluid adenosine deaminase activity in meningitis[J]Swiss Med Wkly.2011.141:w13214． Gopal Chandra Ghosh, Brijesh Sharma. CSF ADA Determination in Early Diagnosis of Tuberculous Meningi

44、tis in HIV-Infected Patients[J]. Scientifica (Cairo).2016;2016:5820823.,,2.2.8 β2-微球蛋白 （Beta-2 Microglobulin， β2-MG）：β2-MG是一種小分子蛋白質(zhì)，其存在于所有有核細胞表面，主要分布于淋巴細胞及巨噬細胞表面。正常腦脊液β2-MG含量很少，CNSI時中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)免疫系統(tǒng)被激活，產(chǎn)生大量淋巴細胞及巨噬細胞，使β2

45、-MG合成增加，大量β2-MG由細胞表面脫落進入腦脊液。,,當(dāng)腦脊液中β2-MG含量明顯升高時可能存在細菌性腦膜炎或結(jié)核性腦膜炎，同時進行結(jié)核感染相關(guān)檢驗，則β2-MG可以作為細菌性腦膜炎與其他類型腦膜炎鑒別診斷的一項輔助指標(biāo)。β2-MG水平與細菌性腦膜炎病情的嚴(yán)重程度相關(guān)，檢測腦脊液中β2-MG水平可作為細菌性腦膜炎的診斷指標(biāo)，并有助于觀察療效與預(yù)后。,蔣荷萍．腦脊液乳酸、β2-微球蛋白、c反應(yīng)蛋白和酶活性測定在腦膜炎中的應(yīng)用[J

46、]．檢驗醫(yī)學(xué)，2012，27：609-611．,,2.2.9 可溶性髓細胞觸發(fā)受體1 （Soluble Triggering Receptor Expressed on Myeloid cells-l，STREM-1）TREM是主要表達于中性粒細胞及成熟單核細胞、巨噬細胞表面的免疫球蛋白超家族活化受體，具有活化炎性因子并抑制抗炎因子的作用，從而在炎性反應(yīng)的觸發(fā)及放大過程中發(fā)揮作用。STREM-1是TREM-1的可溶形式，在感

47、染過程中被分泌到體液或血漿中。,,細菌性腦膜炎時，腦脊液中的STREM-1明顯升高，以25ng/L為界對細菌性腦膜炎診斷的靈敏度達90%，特異度達93.5%。隨著感染的有效控制STREM-1水平逐漸下降，動態(tài)檢測腦脊液中STREM-1水平可以反映感染控制情況。,郭光輝,蔣巧雅,柬振華.可溶性髓系細胞觸發(fā)受體-1在細菌性腦膜炎診斷中的意義[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2011,32,951-952,954． 禚志紅,郭果,田培超等.可溶

48、性髓樣細胞觸發(fā)受體-1、乳酸在細菌性腦膜炎患兒中的變化[J].中華實用兒科臨床雜志,2013,28:864-867．,,2.2.10 S-100β蛋白S-100β被認(rèn)為是神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞損傷的標(biāo)志物并且參與顱內(nèi)感染的病理過程，對CNSI病情判斷和預(yù)后評估有重要的臨床價值。,,研究發(fā)現(xiàn)細菌性腦膜炎腦脊液中S-100β含量明顯高于病毒性腦膜炎，而且當(dāng)S-100β取值3.1ng/mL時，其鑒別細菌性腦膜炎與病毒性腦膜炎的靈敏度可達90%，

49、特異度達100%。MRI證實感染后存在神經(jīng)元損傷患者的腦脊液S100 β水平明顯高于感染后未損傷組及正常對照組。,Jung K,Goerdt C,Lange P,et a1.The use of S100βand Tau protein concentrations in the cerebrospinal fluid for the differential diagnosis of bacterial meningitis:a

50、retrospective analysis[J].Eur Neurel,2011,66:128-132．Park JW, Suh GI, Shin HE. Association between cerebrospinal fluid S100B protein and neuronal damage in patients with central nervous system infections[J]. Yonsei Med

51、J, 2013, 54(3): 567-571.,,急性期病毒性腦炎組腦脊液、血液S-100β水平明顯高于化腦組和對照組,提示病毒侵襲使主要存在于星形膠質(zhì)細胞中的S-100β大量釋放入腦脊液。手足口病并病腦患兒腦脊液S-100β水平與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān),可用來預(yù)測病腦的發(fā)生。,原芳,喬靜. S-100 β 檢測在嬰幼兒中樞神經(jīng)感染診療中的應(yīng)用[J]. 中國社區(qū)師,2014,14(32):117,119. 費安興. 手足口病患兒血

52、清及腦脊液中S100 β 和NSE的表達與病毒性腦炎發(fā)生的相關(guān)性分析[J]. 中國婦幼健康研究,2014(3):432-433,434.,,2.2.11 胱抑素C (Cystatin-C，Cys-C)Cys-C為人體所特有,主要由柔腦膜合成,由有核細胞分泌產(chǎn)生,且無組織特異性,廣泛分布在腦脊液、血液、唾液、尿液中,但以腦脊液中含量最高,濃度約為血清濃度的5倍左右。Cys-C的重要功能是抑制內(nèi)源性半胱氨酸蛋白酶活性,是目前

53、發(fā)現(xiàn)的對組織蛋白酶B抑制作用最強的抑制劑。,武艷,孫靜娜,肖志敏,等. 中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染胱抑素C水平變化的臨床意義[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012,21(13):1442-1443.,,化腦早期,腦組織細胞大量變性、壞死釋放半胱氨酸蛋白酶,使腦脊液中Cys-C的分泌增加以抑制半胱氨酸蛋白酶的活性,而隨著病程發(fā)展,細菌對有核細胞的破壞增多,腦脊液中Cys-C水平可能會下降。病毒性腦膜炎為急性非化膿性炎性反應(yīng),表現(xiàn)為腦膜充血、水

54、腫,淋巴細胞和纖維蛋白浸潤,細胞分泌Cys-C則較少。,,,細菌性顱內(nèi)感染腦脊液中TNF-α儀水平顯著升高，當(dāng)TNF-α>75.8pg/ml時，鑒別細菌性及病毒性感染的敏感性及特異性均達100%。當(dāng)IL-6>90pg/dL時，鑒別細菌性及病毒性感染的敏感性可達92.3%．特異性可達100%。當(dāng)IL-8≥773.5pg/dL時，鑒別細菌性及病毒性感染的敏感性達100%，特異性達76%。,Prasad R, Kapoor

55、 R, Srivastava R, Mishra OP, Singh TB. Cerebrospinal fluid TNF-α, IL-6, and IL-8 in children with bacterial meningitis[J]. Pediatr Neurol 2014; 50: 60-5. Abdelmoez AT, Zaky DZ, Maher AM. Role of cerebrospinal fluid IL-8

56、 as a marker for differentiation between acute bacterial and aseptic meningitis[J]. J Egypt Soc Parasitol 2014; 44: 205-10.,,在顱腦損傷和CNSI致腦損傷等情況下，IL-1β的水平及活性明顯增高(可超過30ng/L) ，可以作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的早期診斷指標(biāo)。CNSI腦脊液中可溶性白細胞介素2受體(slL-2R

57、)明顯增高(>1000pg/mL)，且化腦患者腦脊液中slL-2R的增高較病毒性腦膜炎更顯著(P<0.05)。其水平高低與病情輕重正相關(guān)。,張建強,王滿俠,劉利寧,等.中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染患者腦脊液中可溶性白介素-2受體和可溶性細胞問黏附分子-1水平及其臨床意義[J].中國全科醫(yī)學(xué),2010,13(5):482-484． Prasad R,Kapoor R,Srivastava R,et a1.Cembrospinal flu

58、id TNF-a,IL-6,and IL-8 in children with bacterial meningitis[J].Pediatr Neurol,2014,50:60-65．,,IL-10又稱為細胞因子合成抑制因子，在化膿性和病毒性腦膜炎等顱內(nèi)感染中，腦脊液IL-10水平顯著升高(>20pg/mL)。IFN-γ主要由活化的輔助性T1(Thl)樣細胞、活化的自然殺傷(NK)細胞產(chǎn)生，能增單核巨噬細胞的抗病毒能力，IF

59、N-γ在病毒性腦炎患兒腦脊液中顯著升高(可達到28.7pg/mL) 。,Mistchenko A S,Fomari M C,Viegas M,et a1.Detection of interleukin 10 in cerebrospinal fluid of patients witll subacute sclerosing paneneephalitis[J].J Neumvirol,2005,1(I):66-69． 李山,李靈

60、真,孔繁元.顱內(nèi)感染患者腦脊液和血清中IFN- γ 、IL-10、S-100B蛋白含量的變化及其意義[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2010,32(2):207-210．,,IFN-γ由結(jié)核分枝桿菌活化的Th1 細胞產(chǎn)生,誘導(dǎo)單核巨噬細胞的活化,在結(jié)腦的發(fā)病過程中起著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)結(jié)腦患者腦脊液IFN-γ水平明顯高于對照組,且隨病程進展,腦脊液IFN-γ水平逐漸升高,提示其對結(jié)腦的輔助診斷及預(yù)后有一定的指導(dǎo)意義。IFN-γ對結(jié)腦的診斷

61、敏感性為88.46%, 特異性為87.5% 。,Bekmurzayeva A, Sypabekova M, Kanayeva D. Tuberculosis diagnosis using immunodominant, secreted antigens of Mycobacterium tuberculosis[J]. Tuberculosis(Edinb), 2013,93(4):381-388.,Nathan C Bahr, D

62、avid R Boulware.Methods of rapid diagnosis for the etiology of meningitis in adults [J]. Biomark Med,2014,8(9):1085–1103.,,,多功能液相芯片分析系統(tǒng) （Luminex技術(shù)）ELISPOT酶聯(lián)免疫斑點分析儀超敏多因子電化學(xué)發(fā)光分析儀 （Quick plex SQ120）,4.1 Luminex基本原理,5

63、4,捕獲分子,待測分子,報告分子,Luminex技術(shù)是在有色微球、激光技術(shù)、應(yīng)用流體學(xué)及高速數(shù)字信號處理技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種多功能的液相分析平臺熒光編碼微球—>共價交聯(lián)（抗體、抗原、核酸）—>進行反應(yīng)或者雜交—>激光檢測,液相芯片的應(yīng)用,免疫學(xué)分析細胞因子檢測受體－配體分析酶分析蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用分析蛋白質(zhì)－DNA相互作用分子核酸研究SNP檢測基因表達譜分析,55,4.2 Elispot熒光

64、款(ELR06 IFL),AID iSpot Reader是近年來在EliSpot/FluoroSpot 技術(shù)上發(fā)展起來的最為先進的酶聯(lián)/熒光免疫斑點分析儀酶聯(lián)反應(yīng)為基礎(chǔ)的可見光酶聯(lián)斑點分析（傳統(tǒng)ELISPOT assay）和熒光斑點分析（以EliSpot為基礎(chǔ)的FluoroSpot assay),56,,ELISPOT法源自ELISA，又突破傳統(tǒng)ELISA法ELISA通過顯色反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上測定吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得出定量的可

65、溶性蛋白總量；而ELISPOT通過顯色反應(yīng)在細胞分泌這種可溶性蛋白的相應(yīng)位置上顯現(xiàn)清晰可辨的斑點，可直接在顯微鏡下人工計數(shù)斑點或通過ELISPOT分析系統(tǒng)對斑點進行計數(shù)由于是單細胞水平檢測，ELISPOT比ELISA和有限稀釋法等更為靈敏ELISPOT以刺激劑激活細胞時，不會影響活化細胞分泌細胞因子,58,4.3 MSD-SQ120,可用于檢測物質(zhì)的免疫原性、內(nèi)分泌激素等，其特點是快速、微量、準(zhǔn)確MSD電化學(xué)發(fā)光技術(shù)與傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫