人體機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)胃腸道運(yùn)動(dòng)觀察概述

1、人體機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn),有機(jī)磷酸酯類中毒和解救及膽堿酯酶活性測(cè)定,201550708 及廷宇,1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?（1）觀察有機(jī)磷酸酯類中毒的癥狀及阿托品和解磷定的解救效果（2）學(xué)習(xí)膽堿酯酶活性的測(cè)定方法，觀察中毒前后及用不同藥物解救后膽堿酯酶活性的變化,有機(jī)磷酸酯中毒原理,,,有機(jī)磷酸酯類進(jìn)入人體后，其含磷基團(tuán)中親電性的磷與但見(jiàn)酶酯解部位絲氨酸羥基中的親和性氧進(jìn)行共價(jià)鍵結(jié)合，生成磷?；憠A酯酶復(fù)合物。該復(fù)合物使膽堿酯酶活性難以恢復(fù)，從而使乙

2、酰膽堿大量積聚，產(chǎn)生中毒癥狀。早期用膽堿酯酶復(fù)活藥可部分恢復(fù)膽堿酯酶的活性，若搶救不當(dāng)或中毒時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，膽堿酯酶一旦老化，再用膽堿酯酶復(fù)活藥也作用不大。所以，一旦中毒，必須迅速搶救并盡早使用膽堿酯酶復(fù)活藥,阿托品、解磷定解救原理,阿托品 抗膽堿藥阿托品的作用機(jī)制為競(jìng)爭(zhēng)性拮抗乙酰膽堿或擬膽堿藥對(duì)M受體的激動(dòng)作用，對(duì)M樣癥狀有效。,磷?；憠A酯酶,復(fù)活的膽堿酯酶,磷?；饨饬锥?復(fù)合物,復(fù)活的膽堿酯酶,,,實(shí)驗(yàn)材料,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：家兔

3、，2.5-3.0kg，雌雄均可。實(shí)驗(yàn)藥品5%敵百蟲 0.1%硫酸阿托品2.5%解磷定 1%肝素10%草酸鉀 0.007M氯化乙酰膽堿，1M鹽酸羥胺，3.5N氫氧化鈉，4N鹽酸，0.37M三氯化鐵，磷酸緩沖液（pH7.2）,,實(shí)驗(yàn)器材：嬰兒秤，測(cè)瞳尺，注射器（2ml、5ml、10ml、20ml），頭夾，濾紙，干棉球，比色杯，燒杯，試管架，10m

4、l試管，微量移液器，漏斗，采血瓶，試管刷等。 超級(jí)恒溫水浴，722型分光光度計(jì),實(shí)驗(yàn)方法,1. 取家兔，稱重，分組，觀察： 活動(dòng)情況 呼吸（呼吸頻率、有無(wú)呼吸困難、呼吸道分泌物） 瞳孔大?。y(cè)瞳尺測(cè)量直徑，注意光線的影響） 唾液分泌：是否正常

5、大小便：有無(wú)失禁 肌張力：是否正常 肌震顫：有無(wú) 采取正常家兔心臟血樣：1.0ml放入1號(hào)采血瓶 （注射器肝素抗凝；采血瓶草酸鉀抗凝）,,2. 復(fù)制急性有機(jī)磷酸酯類中毒模型： 耳緣靜脈注射敵百蟲1.5ml/kg，10-15分鐘出現(xiàn)中毒癥狀 觀察中毒癥狀，方法體

6、同上 采取中毒后家兔心臟血樣1.0ml放入2號(hào)采血瓶 注意：采血時(shí)間在15-20分鐘內(nèi)或中毒癥狀明顯時(shí)進(jìn)行，勿遲亦勿早,,3. 有機(jī)磷酸酯類中毒解救： 甲組：阿托品1.0ml/kg 乙組：解磷定4.0ml/kg 10-15分鐘癥狀緩解 采取解救后家兔心臟血樣1.0ml放入3號(hào)采血瓶

7、 注意：采血時(shí)間為藥物解救后的20分鐘左右為宜 （注射器肝素抗凝；采血瓶草酸鉀抗凝）,4. 膽堿酯酶活性測(cè)定：膽堿酯酶活性測(cè)定步驟見(jiàn)表1.表1 家兔血漿膽堿酯酶活性測(cè)定方法,,操作注意事項(xiàng)：1）每加入一種試劑都要混勻，加血樣時(shí)要將3個(gè)小瓶中的血樣2）第二次水浴30min時(shí)用鹽酸羥胺和氫氧化鈉等容量混合配制堿性羥胺（用前20min配制）3）加入各種試劑的順序不能顛倒4）過(guò)濾要充分，濾液

8、澄清透明5）加樣結(jié)束后各試管的容量相同,,722分光光度計(jì)比色測(cè)定蒸餾水調(diào)零A3+（A2﹣A1）﹣A樣為分解的Ach理論上所產(chǎn)生的光密度值選擇λ=480nm測(cè)出光密度A1～A6計(jì)算酶活性值、活性百分?jǐn)?shù)ChE活性酶活性百分?jǐn)?shù),說(shuō)明：A3﹣A1為加入的7µM Ach的光密度值對(duì)照Ⅰ、對(duì)照Ⅱ、對(duì)照Ⅲ為無(wú)血零點(diǎn)管、有血零點(diǎn)管、標(biāo)準(zhǔn)Ach管,膽堿酯酶活性測(cè)定的原理操作方法及注意事項(xiàng),（三）膽堿酯酶活性測(cè)定的原理

9、 在一定的溫度、pH值和時(shí)間的條件下，水解乙酰膽堿的量和AChE活性成正比。因此，在一定量的血液中，加入一定量的Ach，在一定條件下反應(yīng)一定時(shí)間，測(cè)定剩余Ach的量，即可推算出水解的Ach的量，從而推算出膽堿酯酶的活性。 測(cè)定剩余Ach的反應(yīng)：,,鹽酸羥胺與氫氧化鈉反應(yīng)釋放出游離羥胺 NH2OH·HCl+NaOH →NH2OH+NaCl+H2O剩余Ach與游離羥胺作用，生成羥