豬型圓環(huán)病毒相關(guān)疾病及其控制策略

1、豬2型圓環(huán)病毒相關(guān)疾病及其控制策略 曹勝波等寫 操繼躍教授講授,豬圓環(huán)病毒（porcine circovirus, PCV）由Tischer等1974年在PK-15（ATCC-CCL）細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時(shí)認(rèn)為是一種細(xì)胞污染物，8年后他們發(fā)現(xiàn)，該污染物是一種小的無(wú)囊膜的二十面體的單鏈環(huán)狀病毒。圓環(huán)病毒的出現(xiàn)使病毒家族又增加了新的成員。在ICTV（Innternational Committee on the Taxonomy

2、of Viruses）發(fā)表的第6次病毒分類報(bào)告中，人們將豬的圓環(huán)病毒（PCV）、雞貧血病毒（Chicken Anaemia Virus, CAV）、鸚鵡喙羽病毒（Psittacine Beak and Feather Dissease Virus, PBFDAV）3種病毒設(shè)立一個(gè)新科，即圓環(huán)病毒科，下設(shè)一個(gè)圓環(huán)病毒屬。,一、病毒理化性質(zhì) 豬圓環(huán)病毒粒子為20面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)，其直徑大小為17nm，是已發(fā)現(xiàn)的動(dòng)物病毒中最小的一種，病毒粒子在

3、CsC1中的浮密度為1.37g/m3，含有單股負(fù)鏈環(huán)狀DNA，基因組長(zhǎng)1.7kb，無(wú)囊膜，不具凝血活性，對(duì)環(huán)境的抵抗力很強(qiáng)，可抵抗pH3.0的環(huán)境，經(jīng)氯仿作用或56℃作用30分鐘不失活。PCV只在豬原和Vero細(xì)胞培養(yǎng)物中才能完全復(fù)制，并且依賴細(xì)胞周期S期表達(dá)的細(xì)胞蛋白。但在細(xì)胞進(jìn)入S期前用300mM的D-氨基葡萄糖-鹽酸處理細(xì)胞30分鐘，可以促進(jìn)病毒的復(fù)制。PCV可以在PK-15細(xì)胞上增殖但不引起明顯的細(xì)胞病變。對(duì)PCV復(fù)制的分子

4、生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)：PCV以滾環(huán)方式進(jìn)行復(fù)制成雙鏈，每條鏈都可以轉(zhuǎn)錄并編碼一些蛋白質(zhì)。,二、流行病學(xué)1．宿主和傳染源：豬是PCV的主要宿主，此外也有從牛中檢測(cè)到PCV的報(bào)道。Allan（94）報(bào)道在牛、綿羊、雞、火雞、山羊、老鼠、兔子和人的血清中未檢測(cè)到PCV-1抗體，但Tischer（95）報(bào)道用間接免疫熒光和ELISA相結(jié)合的方法在人、老鼠和牛中檢測(cè)到了PCV-1抗體，抗體陽(yáng)性率分別為：30.2%、12-69%和35%。因此對(duì)于PCV

5、到底是否感染人、老鼠、牛等其它動(dòng)物還有待于進(jìn)一步研究。,2．傳播方式：PCV對(duì)豬有較強(qiáng)易感性，可經(jīng)口腔、呼吸道感染不同年齡的豬，其它未接種豬的同居感染率高達(dá)100%。豬感染PCV-2后，可于5-12周齡時(shí)發(fā)生PMWS，發(fā)病率為5%-15%，死亡率可達(dá)50%。少數(shù)懷孕母豬感染PCV后，可經(jīng)胎盤垂直感染給仔豬。感染豬可自鼻液、糞便等廢物中排出病毒，引起病毒在不同豬個(gè)體之間進(jìn)行傳播。鳥類、嚙齒動(dòng)物如鼠等帶毒，可能會(huì)引起傳播。外觀正常的公豬精液

6、中可檢測(cè)到PCV。混群、應(yīng)激、高密度飼養(yǎng)等因素可誘發(fā)仔豬發(fā)病。,3．流行與分布：自PCV發(fā)現(xiàn)以來(lái)，PCV-1和PCV-2已經(jīng)證實(shí)為世界性流行和存在的病毒。我國(guó)由郎洪武等2001年首次報(bào)道了從豬群中分離到了PCV-2病毒，周繼勇（2002）對(duì)浙江省11個(gè)地方進(jìn)行了PCV-2感染的血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示，所有被調(diào)查豬場(chǎng)均有PCV-2感染，豬的PCV-2感染率為58%，成年種豬的感染率高于斷奶豬的感染率；我室用自行研制的ORF2-ELISA診斷

7、試劑盒對(duì)對(duì)湖北、江西、上海、湖南、河南五省的送檢血清進(jìn)行了檢測(cè)。PCV-2血清總陽(yáng)性率為52.8%，仔豬陽(yáng)性率為28%，肥豬陽(yáng)性率為50%，母豬陽(yáng)性率為67.4%，說(shuō)明PCV-2在我國(guó)豬群中感染情況已經(jīng)相當(dāng)嚴(yán)重。,三、PCV-2相關(guān)疾病1．?dāng)嗄套胸i多系統(tǒng)衰弱綜合癥（PMWS）本病由Clark于1996年首次報(bào)道，隨后美洲、歐洲和亞洲各國(guó)相繼報(bào)道了該病。目前PMWS已經(jīng)成為了嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的一種世界性傳染病，并引起了國(guó)際獸醫(yī)界的高度關(guān)

8、注。2003年在韓國(guó)召開的第一界亞洲豬病會(huì)上，PMWS是會(huì)議的重要內(nèi)容之一。,臨床癥狀與病理變化：患豬表現(xiàn)為肌肉衰弱無(wú)力、下痢、呼吸困難、黃疸、貧血、生長(zhǎng)發(fā)育不良，腹股溝淋巴結(jié)腫脹明顯，發(fā)病率為5-30%，死亡率為5-40%不等，康復(fù)豬成為僵豬。剖檢可見淋巴結(jié)腫大、肝硬變、多灶性粘液膿性支氣管炎。肺臟和淋巴結(jié)是最主要的受損傷的器官?？梢鸱闻K衰竭或萎縮導(dǎo)致斑點(diǎn)狀陰影彌散。組織學(xué)上可見肉芽腫性間質(zhì)性肺炎，常伴有巨細(xì)胞的存在，氣管上皮壞死或

9、脫落并演發(fā)為細(xì)支氣管炎。在上皮細(xì)胞的核內(nèi)和嗜菌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)存在PCV-2抗原。在有些感染豬經(jīng)常出現(xiàn)全身性的淋巴結(jié)病，尤其是腹股溝、腸系膜、支氣管以及縱隔淋巴結(jié)表現(xiàn)顯著。,在有些感染豬經(jīng)常出現(xiàn)全身性的淋巴結(jié)病，尤其是腹股溝、腸系膜、支氣管以及縱隔淋巴結(jié)表現(xiàn)顯著，切面呈白色均質(zhì)狀。在淋巴結(jié)中可見B細(xì)胞濾泡減少而T細(xì)胞擴(kuò)散，導(dǎo)致大量的組織細(xì)胞和多核巨細(xì)胞浸潤(rùn)。疾病的中早期在淋巴組織的B細(xì)胞依賴區(qū)可見嗜堿性胞質(zhì)內(nèi)包含體成束聚集或隨機(jī)分布于淋巴結(jié)

10、。在樹突狀細(xì)胞以及單核巨嗜細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可以發(fā)現(xiàn)大量的PCV-2抗原。此種情況在脾臟和集合淋巴結(jié)也類似。肝臟可見溫和性黃疸以及明顯的小葉間結(jié)締組織萎縮。早期的組織學(xué)損傷包括淋巴組織細(xì)胞浸潤(rùn)及單個(gè)肝細(xì)胞壞疽。在腎臟皮質(zhì)可見彌散性白色斑點(diǎn)并經(jīng)常伴有骨盆周圍水腫，組織學(xué)上在骨盆周圍水腫和增生組織可見多灶性淋巴組織細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)，還可見非膿性血管炎。通常PCV-2抗原分布于被感染的管狀上皮細(xì)胞和單核巨嗜細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)。在胰腺中可見通常與淋

11、巴組織細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)的腺泡和導(dǎo)管上皮出現(xiàn)多灶性萎縮和再生。在這些腺泡和導(dǎo)管上皮細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)可以檢測(cè)到PCV-2抗原。感染個(gè)體間的損傷因病毒毒力、再次感染、感染時(shí)期、宿主遺傳以及免疫應(yīng)答的情況不同而存在差異。,2、皮炎和腎病綜合癥（PDNS）此病通常發(fā)生在8-18周齡的豬。首次報(bào)告于1993年，隨后在美國(guó)、歐洲和南非、亞洲均有報(bào)道。此癥的發(fā)病率為0.15-2%，有時(shí)候達(dá)到7%。皮膚出現(xiàn)紅紫色病變斑塊，在會(huì)陰部和四肢最明顯，這些斑塊有時(shí)會(huì)

12、相互融合。在極少情況下皮膚病變會(huì)消失。病豬表現(xiàn)皮下水腫，食欲喪失，有時(shí)體溫上升。通常，病豬在3天內(nèi)死亡，有時(shí)可以維持2-3周。病理組織學(xué)變化為出血性壞死性皮炎和動(dòng)脈炎以及滲出性腎小球性腎炎和間質(zhì)性腎炎，并因而出現(xiàn)胸水和心包積液。,3、間質(zhì)性肺炎間質(zhì)性肺炎主要危害6-14周齡的豬，發(fā)病率在2-30%之間，死亡率在4-10%之間。眼觀病變?yōu)閺浡蚤g質(zhì)性肺炎，顏色灰紅色。有時(shí)可見肺部存在Ⅱ型肺細(xì)胞增生區(qū)和細(xì)支氣管上皮壞死并含壞死細(xì)胞碎片的

13、區(qū)域，肺泡腔內(nèi)有時(shí)可見透明蛋白。,4、繁殖障礙研究表明PCV-2感染可以造成繁殖障礙，導(dǎo)致母豬返情率增加、產(chǎn)木乃伊胎、流產(chǎn)以及死產(chǎn)和產(chǎn)弱仔等。此外，PCV-2還可以引起仔豬的先天性震顫。,五、致病機(jī)理PCV-2主要侵害機(jī)體的免疫系統(tǒng)，單核細(xì)胞和巨嗜細(xì)胞是PCV-2的靶細(xì)胞。感染PCV-2后，可導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的減少，從而造成機(jī)體的免疫抑制。但單獨(dú)感染PCV-2往往不能引發(fā)嚴(yán)重的損傷，只有當(dāng)單核細(xì)胞和巨嗜細(xì)胞中的PCV-2超

14、過(guò)一定量時(shí)才會(huì)引發(fā)PMWS而致病。在這一過(guò)程中，混合感染PRRSV、PPV和PRV可能起著重要作用。因?yàn)橐环矫鍼RRSV、PPV可以促進(jìn)PCV-2在體內(nèi)的增值，加速向PMWS方向轉(zhuǎn)變，另一方面由于PCV-2導(dǎo)致的免疫抑制會(huì)降低機(jī)體對(duì)其它病原的免疫能力，從而造成更嚴(yán)重的疾病。,Allan等用PCV-2與PRRSV混合液接種未吃初乳的仔豬，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于只接種PCV-2的仔豬，PRRSV有助于PCV-2在豬體內(nèi)的繁殖與分布：PPV也有類似

15、PRRSV的作用，促進(jìn)PCV-2的繁殖與分布：?jiǎn)魏思?xì)胞和巨噬細(xì)胞可能是這三種病毒的共同靶細(xì)胞。該結(jié)果從理論上解釋了為什么PCV-2與PPV或PRRSV協(xié)同感染可以導(dǎo)致仔豬出現(xiàn)嚴(yán)重的PMWS臨床癥狀和病理變化。,在一定條件下，免疫刺激可能也有助于PCV-2在豬體內(nèi)的復(fù)制，對(duì)PMWS臨床癥狀的形成有促進(jìn)作用。Krakowka等用PCV-2接種1日齡無(wú)菌豬，在3和7日齡注射KLH（Keyhole Limpet Haemocyanin）的弗氏不

16、完全佐劑混合物。結(jié)果顯示：只接種PCV-2的仔豬無(wú)一出現(xiàn)PMWS癥狀：但接種過(guò)PCV-2和KLH弗氏不完全佐劑混合物的仔豬都表現(xiàn)出中等或嚴(yán)重的PMWS癥狀。Kyriakis等，同一批來(lái)自曾經(jīng)發(fā)生過(guò)PMWS豬場(chǎng)的仔豬進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：分別接種過(guò)支原體性肺炎疫苗和免疫增強(qiáng)劑的兩組實(shí)驗(yàn)豬群PMWS的發(fā)病率為42.9%和50%，明顯高于陰性對(duì)照組。,六、診斷該病僅靠臨床癥狀難以確診，因此主要靠實(shí)驗(yàn)室診斷。實(shí)驗(yàn)室診斷方法可分為抗體和抗原檢測(cè)

17、法。檢測(cè)抗體的方法有：間接免疫熒光、免疫組織化學(xué)法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和單克隆抗體法等。但由于PCV-1和PCV-2的同源性較高，存在一定的血清學(xué)交叉反應(yīng)，故上述方法不能達(dá)到鑒別診斷PCV-1和PCV-2的目的。隨著對(duì)PCV分子生物學(xué)研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)PCV-1和PCV-2的ORF2表達(dá)蛋白之間無(wú)交叉反應(yīng)，因此一種利用PCV-2ORF2表達(dá)蛋白建立的特異性ELISA方法孕育而生。該方法可以達(dá)到鑒別診斷PCV-2的目的，因此可以用于臨床

18、上大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查。,目前，我室已經(jīng)成功建立了ORF2-ELISA診斷方法并研制了診斷試劑盒。檢測(cè)抗原的方法主要有：病毒分離鑒定、組織原位雜交和PCR方法等。病毒分離鑒定：取患豬的淋巴結(jié)、肺臟經(jīng)勻漿除菌處理后，接種到?jīng)]有污染圓環(huán)病毒的PK-15細(xì)胞中傳代擴(kuò)大培養(yǎng)后做動(dòng)物回歸試驗(yàn)或經(jīng)電子顯微鏡直接觀察病毒離子。組織原位雜交：用放射性或生物素標(biāo)記的PCV-2的特異性探針與患豬組織中的病毒核酸進(jìn)行分子雜交，經(jīng)放射自顯影或特異性染色后

19、即可達(dá)到診斷的目的。該方法特異性和靈敏性很高，而且利用PCV-1和PCV-2特異性探針也可以達(dá)到鑒別診斷的目的。此外該方法還可以直接顯示病毒在組織細(xì)胞中分布，對(duì)研究病毒致病機(jī)理有重要意義。,PCR：設(shè)計(jì)PCV-1和PCV-2的特異性引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，可以從病料中擴(kuò)增出PCV的特異性DNA片段。該方法是一種高度準(zhǔn)確和靈敏的診斷方法，可用于PCV的臨床常規(guī)檢測(cè)。此外，我室還建立了一種多重PCR方法，可以用于同時(shí)檢測(cè)PCV-2，PPV和P

20、RV病毒核酸。,七、控制策略對(duì)PCV-2綜合防制主要應(yīng)從以下四個(gè)方面著手。1．減少斷奶仔豬應(yīng)激：避免仔豬過(guò)早斷奶，斷奶后更換飼料：避免斷奶后并窩并群：避免過(guò)早或多次注射疫苗；避免高密度飼養(yǎng)。2．強(qiáng)化豬場(chǎng)生物安全：即減少后備母豬的購(gòu)進(jìn)數(shù)量，加強(qiáng)豬舍環(huán)境消毒，實(shí)行全進(jìn)全出制度。,3．實(shí)施嚴(yán)格的防疫制度：對(duì)于分娩舍應(yīng)清理糞池和糞溝，徹底沖洗消毒：清洗母豬，并進(jìn)行驅(qū)蟲治療；仔豬寄養(yǎng)限在24小時(shí)之內(nèi)，并盡量減少寄主和并窩；母豬采用合理的免疫

21、接種程序。對(duì)于斷奶仔豬舍應(yīng)采用小欄飼養(yǎng)，欄與欄之間須有實(shí)體分隔墻；清理糞池和糞溝，沖洗和消毒；仔豬入欄時(shí)降低飼養(yǎng)密度：確保良好的通風(fēng)和理想的溫度；不混群。對(duì)于生長(zhǎng)發(fā)育成豬舍應(yīng)小群飼喂，有實(shí)體隔墻；清理糞尿排出系統(tǒng)，沖洗消毒；降低飼養(yǎng)密度飼養(yǎng)；注意通風(fēng)和溫度；欄與欄之間不混群，不同月齡的豬群分開飼養(yǎng)。,4．做好疫病的綜合防制：由于豬2型圓環(huán)病毒單獨(dú)感染一般不會(huì)造成多大危害，而在其它病原的協(xié)同作用下可以導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，因此，在規(guī)模化豬場(chǎng)

22、中做好偽狂犬、細(xì)小病毒、藍(lán)耳病、胸膜肺炎、副豬嗜血桿菌病等疾病的綜合防制，是間接控制圓環(huán)病毒的重要策略之一。,4.1 PMWS：控制藥物（預(yù)防）——附優(yōu)特樂(lè)；4.2 PDNS：控制繼發(fā)感染——萬(wàn)特肺靈；控制皮膚感染，抗寄生蟲藥物——樂(lè)去蟲；皮膚細(xì)菌感染，0.1%高錳酸鉀水沖洗皮膚，青霉素G控制鏈球菌、壞死桿菌引起的皮膚病。4.3 間質(zhì)性肺炎：控制感染藥物——萬(wàn)特肺靈。,4.4 繁殖障礙：生殖道有惡露的處理，流產(chǎn)后或產(chǎn)后48h內(nèi)注射前