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文檔簡介
1、桿狀病毒是雙鏈DNA病毒的一個大家族,該病毒主要感染鱗翅目、雙翅目、膜翅目昆蟲及甲殼類動物,區(qū)別于其它病毒的顯著性特征是它具有雙相復制周期,其生活周期中產(chǎn)生兩種結構與功能不同的病毒粒子:出芽病毒(BV)和包涵體病毒(ODV)。家蠶核型多角體病毒(BmNPV)是昆蟲桿狀病毒科核多角體病毒屬的代表成員,雖然關于其感染的機制進行了大量研究,但仍有許多問題需要進一步解決,本論文主要對GP64及膽固醇介導BmNPV BV入侵細胞機制及GP64信號
2、肽特性作了進一步的研究,以揭示膜融合蛋白 GP64膽固醇識別序列(CRAC)與膽固醇的相互作用是BV入侵細胞的關鍵,同時也證明了GP64信號肽在引導GP64跨膜轉運后并沒有發(fā)生切割。本研究豐富了桿狀病毒感染分子機制的理論。
本論文主要從以下幾個方面研究GP64與膽固醇介導BmNPV BV入侵細胞的分子機制:BmNPV GP64序列分析及信號肽特性分析、BmNPVgp64缺失病毒的構建、BmNPV GP64CRACs分析及與膽固
3、醇互作探究。這些研究結果為后期闡述BmNPV入侵細胞機制提供參考。
1)BmNPV GP64序列分析及信號肽特性分析:BmNPVgp64全長1593 bp,編碼530個氨基酸,其N端信號肽序列為38個氨基酸殘基。通過序列比對發(fā)現(xiàn) BmNPV GP64與AcMNPV GP64的同源性達到93%;在BmNPV GP64信號肽內部加上c-Myc-Tag,再轉染BmN細胞,通過western blot驗證BmNPV GP64信號肽在完
4、成跨膜轉運后是否被切割。
2)BmNPV gp64缺失病毒的構建:利用同源重組的方法將打靶DNA分子通過電擊轉化到Red重組系統(tǒng)中,通過兩種抗性篩選陽性克隆。設計鑒定引物及缺失基因內部引物進行PCR鑒定,將鑒定正確的缺失病毒重新構建新的Bac-to-Bac系統(tǒng)。該成果將為后續(xù)研究奠定基礎。
3)BmNPV GP64 CRACs分析及與膽固醇互作探究:通過序列比對發(fā)現(xiàn),AcMNPV GP64含有3個CRACs,而BmN
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