革蘭氏染色法的過程及原理

1、革蘭氏染色法的過程及原理一，過程1涂片將培養(yǎng)的不同菌分別作涂片（注意涂片切不可過于濃厚），干燥、固定。固定時通過火焰l一2次即可，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。2染色(1）初染加草酸鉸結(jié)晶紫一滴，約一分鐘，水洗。(2）媒染滴加碘液沖去殘水，并覆蓋約一分鐘，水洗。(3）脫色將載玻片上面的水甩凈，并襯以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現(xiàn)紫色時為止，約20一30秒鐘，立即用水沖凈酒精。(4）復(fù)染用番紅液染1一2分鐘，水洗。(5）鏡檢

2、干燥后，置油鏡觀察革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應(yīng)為準，過于密集的細菌，常常呈假陽性。(6)同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合制片，作革蘭氏染色對比。二，原理革蘭氏染色法（Gramstain）不僅能觀察到細菌的形態(tài)而且還可將所有細菌區(qū)分為兩大類：染色反應(yīng)呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，用G＋表示：染色反應(yīng)呈紅色（復(fù)染顏色）的稱為革蘭氏陰性細菌，用G一表示。細菌對于革蘭氏染色的不同反應(yīng)，是由于

3、它們細胞壁的成分和結(jié)構(gòu)不同而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由膚聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成的，在染色過程中，當用乙醇處理時，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，通透性降低，使結(jié)晶紫一碘復(fù)合物被保留在細胞內(nèi)而不易脫色，因此，呈現(xiàn)藍紫色；革蘭氏陰性細菌的細胞壁中膚聚糖含量低，而脂類物質(zhì)含量高，當用乙醇處理時，脂類物質(zhì)溶解，細胞壁的通透性增加，使結(jié)晶紫一碘復(fù)合物易被乙醇抽出而脫色，然后又被染上了復(fù)染液（番紅）的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。革蘭氏染色的

4、關(guān)鍵在于嚴格掌握酒精脫色程度，如脫色過度，則陽性菌可被誤染為陰性菌：而脫色，不夠時，陰性菌可被誤染為陽性菌。此外，菌齡也影響染色結(jié)果，如陽性菌培養(yǎng)時間過長，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反應(yīng)。青霉素作用機制干擾細菌細胞壁的合成。青霉素你的結(jié)果與細胞壁的成分粘肽結(jié)構(gòu)中德D丙氨酰D丙氨酸近似，可與后者競爭轉(zhuǎn)肽酶，阻礙你粘肽的形成，造成細胞壁的缺損，使細菌失去細胞壁的滲透屏障，對細菌起到殺滅作用。溶菌酶與青霉素對細菌細胞壁的作用溶菌酶

5、作用機制：是一種能水解致病菌種黏原生質(zhì)體，球狀體；形成；用溶菌酶除盡原有的細胞壁，再用青霉素抑制新生細胞壁的合成，最后得到一層僅有細胞膜包裹的圓球狀滲透敏感細胞特點；無完整的細胞壁，細胞呈球狀，對滲透壓極其敏感，革蘭氏染色陰性，細胞不能分裂，對相應(yīng)噬菌體不敏感，無繁殖能力實踐意義；比正常有細胞壁的細菌更容易導(dǎo)入外源遺傳物質(zhì)，是研究遺傳規(guī)律和進行原生質(zhì)體融合育種的良好材料支原體；形成；在長期進化中形成，適應(yīng)自然生活條件特點；細胞膜中含有甾