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文檔簡介
1、目的:結(jié)核性腦膜炎(tuberculousmeningitis,TBM)簡稱結(jié)腦,占全身結(jié)核病的5-10%,是最嚴(yán)重的肺外結(jié)核病,致死率和致殘率較高,為全球性的公共衛(wèi)生問題,早期診斷和及時(shí)規(guī)范治療是降低致死率和致殘率的關(guān)鍵。結(jié)腦的致病菌是結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)簡稱結(jié)核桿菌(tuberclebacilli),屬分枝桿菌屬,因菌體含大量分枝菌酸,故不易著色,但加溫或延長染色時(shí)間后能抵抗鹽酸
2、乙醇的脫色,為抗酸桿菌(acid-fastbacilli)的一種類型。若腦脊液抗酸染色陽性,則提示結(jié)腦的可能性極大。傳統(tǒng)抗酸染色法的抗酸桿菌檢出率低,對(duì)臨床結(jié)腦診斷的意義不大。改良抗酸染色法通過提高有限腦脊液中抗酸桿菌的檢出率,為臨床結(jié)腦的診斷提供直接的病原學(xué)依據(jù)。品紅為抗酸染液的重要成分之一,可以與抗酸桿菌的核酸相結(jié)合,在光鏡下呈現(xiàn)紅色外觀,另外,品紅具有自發(fā)熒光的特性,在特定波長的熒光顯微鏡下觀察,呈現(xiàn)橘紅色外觀,更易于被發(fā)現(xiàn)。通過
3、對(duì)傳統(tǒng)抗酸染色法進(jìn)行改良,尋求有助于結(jié)腦診斷的高效、簡便、快速、經(jīng)濟(jì)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。
方法:對(duì)臨床上考慮結(jié)腦患者的病歷資料進(jìn)行收集,依據(jù)最新的結(jié)腦臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分,根據(jù)得分情況入選確診結(jié)腦組1例,很可能結(jié)腦組15例,可能結(jié)腦組30例,不可能結(jié)腦組5例,病例組共計(jì)51例,腦脊液標(biāo)本共126份。對(duì)照組為非結(jié)腦,共36例,腦脊液標(biāo)本38份,包括腦膜癌病12例,化膿性腦膜炎5例,隱球菌性腦膜炎4例,中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病4例,吉
4、蘭巴雷綜合征5例,腦囊蟲病2例,多發(fā)性硬化2例,病毒性腦膜炎1例,布氏桿菌病1例。病例組與對(duì)照組的所有病例均留取至少一次的新鮮腦脊液標(biāo)本行改良抗酸染色,分別在光學(xué)顯微鏡及熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)抗酸桿菌的數(shù)量,記錄并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。
結(jié)果:
1改良抗酸染色法發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌的形態(tài):光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果,在淡藍(lán)色背景下發(fā)現(xiàn)的抗酸桿菌為淡紅色,呈細(xì)長略彎曲的桿狀,有的呈分枝狀,部分呈短桿狀,測(cè)量其長度2~5μm,寬度0.3~0
5、.5μm,多成堆出現(xiàn),大部分為胞外菌,可見可疑胞內(nèi)菌,位于嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及淋巴細(xì)胞內(nèi)。熒光顯微鏡下觀察,抗酸桿菌在黑暗背景下為橘紅色外觀,形態(tài)及大小均與光鏡下保持一致,部分視野內(nèi),相較于光鏡觀察更易于發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。
2病例組與對(duì)照組抗酸桿菌檢出情況:病例組51例光鏡鏡檢與熒光鏡檢均有44例檢出抗酸桿菌,檢出率86.27%;對(duì)照組光鏡鏡檢與熒光鏡檢均有5例檢出抗酸桿菌,5例抗酸染色陽性者,其中3例為腦膜癌病,1例為腦
6、囊蟲病,1例為化膿性腦膜炎,抗酸桿菌檢出率13.89%。病例組與對(duì)照組抗酸桿菌檢出率,兩者比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P<0.001)。改良抗酸染色的敏感性為84.78%,特異性為86.11%。
3光鏡鏡檢與熒光鏡檢結(jié)果:以病例數(shù)為觀察對(duì)象,病例組光鏡鏡檢與熒光鏡檢均有44例抗酸染色陽性,抗酸桿菌檢出率為86.27%。以腦脊液份數(shù)為觀察對(duì)象,126份腦脊液標(biāo)本中,光鏡鏡檢抗酸染色陽性85份,其中1+:50份、2+:28份、3+:7
7、份,抗酸桿菌檢出率為67.46%,熒光鏡檢抗酸染色陽性為90份,其中1+:49份、2+:31份、3+:10份,抗酸桿菌檢出率71.43%。兩種鏡檢方法檢出率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P=0.359),結(jié)果具有一致性(P<0.001)。
4光鏡鏡檢聯(lián)合熒光鏡檢抗酸桿菌檢出率:病例組126份腦脊液標(biāo)本,光鏡鏡檢抗酸染色陽性85份,抗酸桿菌檢出率為67.46%,熒光鏡檢抗酸染色陽性為90份,抗酸桿菌檢出率71.43%,光鏡聯(lián)合熒光鏡檢時(shí)
8、,抗酸染色陽性97份,檢出率76.98%,比單純光鏡鏡檢或熒光鏡檢的檢出率高,經(jīng)比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.001,P=0.016)。
5單次送檢病例與重復(fù)送檢病例抗酸桿菌檢出率比較:病例組51例中,單次送檢病例26例,重復(fù)送檢病例25例。光鏡鏡檢單次送檢與重復(fù)送檢組抗酸桿菌陽性均為22例,抗酸桿菌檢出率分別為84.62%、88.00%,兩者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P=0.523);熒光鏡檢單次送檢與重復(fù)送檢抗酸桿菌陽性分別為2
9、1例、23例,抗酸桿菌檢出率分別為80.77%、92.00%,兩者比較亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P=0.226)。
6腦脊液細(xì)胞數(shù)與抗酸染色關(guān)系:病例組腦脊液標(biāo)本按細(xì)胞計(jì)數(shù)達(dá)100與否分為兩組,細(xì)胞計(jì)數(shù)<100共14份,抗酸染色陽性8份,抗酸桿菌檢出率57.14%,細(xì)胞計(jì)數(shù)≥100共101份,抗酸染色陽性72份,抗酸桿菌檢出率71.29%,兩組抗酸桿菌檢出率經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無意義(P=0.218)。
7腦脊液細(xì)胞學(xué)與抗酸染
10、色關(guān)系:病例組27份標(biāo)本以嗜中性粒細(xì)胞為主,抗酸染色陽性24份,抗酸桿菌檢出率88.89%;22份標(biāo)本呈混雜細(xì)胞學(xué),其中抗酸染色陽性18份,抗酸桿菌檢出率81.82%;51份標(biāo)本以淋巴細(xì)胞為主,抗酸染色陽性29份,抗酸桿菌檢出率56.86%。腦脊液細(xì)胞學(xué)呈混雜細(xì)胞學(xué)或以嗜中性粒細(xì)胞為主者,抗酸桿菌檢出率高于以淋巴細(xì)胞為主者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.035,P=0.004)。
8病例組各組分抗酸桿菌檢出率比較:以病例數(shù)為
11、觀察對(duì)象,確診組1例,抗酸染色陽性;很可能組15例,抗酸染色陽性12例;可能組30例,抗酸染色陽性26例;不可能組5例,抗酸染色均陽性。以腦脊液標(biāo)本數(shù)為觀察對(duì)象,確診組3份,抗酸染色陽性2份;很可能組51份,抗酸染色陽性36份;可能組65份,抗酸染色陽性42份;不可能組7份,抗酸染色陽性5份。兩種不同觀察對(duì)象下進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,各組分抗酸桿菌檢出率均無差別(P=0.692,P=0.915)。
結(jié)論:
1無論是普通
12、光鏡鏡檢還是熒光鏡檢,改良抗酸染色法相較于傳統(tǒng)抗酸染色可以明顯提高腦脊液標(biāo)本中抗酸桿菌的檢出率,此法敏感性84.78%,特異性86.11%,可作為臨床上可疑結(jié)腦患者篩查的檢測(cè)手段,確診仍需結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果。
2改良抗酸染色光鏡鏡檢與熒光鏡檢的抗酸桿菌檢出率無明顯差別,兩種鏡檢結(jié)果一致性較好,將光鏡鏡檢與熒光鏡檢相結(jié)合,可以提高抗酸桿菌檢出率。
3針對(duì)同一患者的腦脊液標(biāo)本,單次送檢與重復(fù)送檢改良抗酸染色的
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