藥物分析第十一章a抗生素類(lèi)藥物分析

1、第十一章,抗生素類(lèi)藥物的分析,進(jìn)入,返回主目錄,思考與練習(xí),,第一節(jié) 概 述,第二節(jié) β–內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素,第三節(jié) 氨基糖苷類(lèi)抗生素,第四節(jié) 四環(huán)素類(lèi)抗生素,第五節(jié) 抗生素類(lèi)藥物中高分 子雜質(zhì)的檢查,基本要求,基本要求,一、掌握抗生素類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分析方法之間的關(guān)系。二、掌握抗生素類(lèi)藥物的鑒別原理與方法。三、掌握抗生素類(lèi)藥物法定含量測(cè)定方法的原理、測(cè)定方法與計(jì)算。四、

2、熟悉抗生素類(lèi)藥物雜質(zhì)檢查的方法。五、了解抗生素類(lèi)藥物中高分子聚合物檢查。,返 回,第一節(jié) 概述,1. 抗生素藥物的特點(diǎn),,化學(xué)純度較低,活性組分易發(fā)生變異,穩(wěn)定性差,,2. 微生物學(xué)法與理化法的比較,微生物檢定法,理化法,以抗生素對(duì)微生物的殺傷或抑制程度為指標(biāo)衡量抗生素的生物效價(jià),根據(jù)抗生素結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，利用其特有的理化性質(zhì)測(cè)定其含量,已知或新發(fā)現(xiàn)的抗生素、精致品或粗制品均能測(cè)定,測(cè)定化學(xué)結(jié)構(gòu)已知、已提純的抗生素,靈敏度高

3、、樣品需用量小、反映抗生素的醫(yī)療價(jià)值，但操作步驟多、費(fèi)時(shí)、誤差大,迅速、準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性高、樣品需用量小、操作簡(jiǎn)單、省時(shí),3.抗生素的活性以效價(jià)單位來(lái)表示：,每ml或每mg中含有某種抗生素的有效成分的多少，用單位（u）或µg 表示。 1mg青霉素G鈉鹽定為1667單位 1mg青霉素G鉀鹽的單位（u） =1667×356.4/372.5=15

4、95u/mg,分類(lèi)（按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)）： β–內(nèi)酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、 四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、 氯霉素類(lèi)、多肽類(lèi)、抗腫瘤類(lèi) 林可霉素類(lèi)、其他抗生素類(lèi),,,,返 回,第二節(jié) β–內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素,青霉素類(lèi),頭孢菌素類(lèi),青霉素,（青霉素鉀、鈉）,,氨芐西林（氨芐青霉素）,,阿莫西林（羥氨芐青霉素）,,普魯卡因青霉素,頭孢氨芐,,頭孢拉啶,,頭孢羥氨芐,,頭孢噻吩鈉,,,酸性,結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與性質(zhì),一、,,與堿金屬

5、(Na+、K+)成鹽,（一）羧基,易溶于水,與有機(jī)堿(普魯卡因)成鹽,難溶于水,普魯卡因青霉素,,（二）手性C,頭孢菌素類(lèi) C6 C7,青霉素類(lèi) C3 C5 C6,旋光性,﹡,﹡,﹡,﹡,﹡,,（三）共軛體系,青霉素類(lèi) 母核無(wú)明顯UV 多數(shù)有苯環(huán)取代基,UV,（四）β–內(nèi)酰胺環(huán),水溶液 不穩(wěn)定,干燥純凈 穩(wěn)定,不穩(wěn)定性因素,,四元環(huán)張力大,酰胺鍵易水解,例,青

6、霉素的降解反應(yīng),（一）呈色反應(yīng),1. 羥肟酸鐵反應(yīng),β-內(nèi)酰胺類(lèi),呈色,羥肟酸衍生物,（紅、棕、褐）,,,2. 茚三酮反應(yīng),,α-氨基,藍(lán)紫色,3. 雙縮脲反應(yīng),似肽鍵,紫,4. 與重氮苯磺酸反應(yīng),橙黃色,重氮苯磺酸,-,-,5,6,OH,H,C,（偶合）,酚羥基,頭孢哌酮,,5. 與變色酸-硫酸反應(yīng),活潑“-CH2-”,青霉素阿莫西林氨芐西林,△（分解）,,變色酸,顯色,1. K+、Na+的火焰反應(yīng),（二）各種鹽的反應(yīng),2.

7、 沉淀反應(yīng)（青霉素鹽）,遇酸→↓,在過(guò)量HCl或有機(jī)溶劑中溶解,,3. 重氮化 - 偶合反應(yīng),,重氮化-偶合反應(yīng),,芳伯氨基,4. 與三硝基苯酚反應(yīng),△,二芐基乙二胺,mp,三硝基苯酚,,樣品、分解產(chǎn)物,Cu2+,,pH3.8,分子重排,2、,IR法,,3180cm-1?N-H,β–內(nèi)酰胺 ?C=O,1780cm-1,3470cm-1?O-H,1690cm-1仲酰胺?C=O,1250cm-1?C-O,以阿莫西林為例,

8、對(duì)照品對(duì)照法,,三、雜質(zhì)檢查,藥物 檢查項(xiàng)目 檢查方法 頭孢他啶 聚合物 HPLC法 頭孢曲松鈉 頭孢哌酮鈉 頭孢噻肟鈉 頭孢呋辛酯 有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體 HPLC法 頭孢氨芐 有關(guān)物質(zhì) 反相TLC法 青霉素鉀（鈉） 吸收度 紫外分光光度法,1.頭孢他啶聚合物的測(cè)定 固定相：葡聚

9、糖凝膠G-10（ 40~120µm ） 流動(dòng)相A：3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液 流動(dòng)相B：0.01%十二烷基硫酸鈉 對(duì)照品溶液：頭孢他啶對(duì)照品 100µg/ml,1）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：理論塔板數(shù)和拖尾因子用1mg/ml藍(lán)色葡聚糖2000、流動(dòng)相A測(cè)定；重復(fù)性用對(duì)照品溶液、流動(dòng)相B測(cè)定。 N不低于900，拖尾因子0.75~1.5，峰面積的RSD應(yīng)小于5.0%。2）測(cè)定方法 進(jìn)樣供試

10、液，用流動(dòng)相A；進(jìn)樣對(duì)照液，用流動(dòng)相B。以外標(biāo)法計(jì)算，含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計(jì)不得超過(guò)0.3%。,2.頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查 固定相：ODS 流動(dòng)相：0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:38） 1）頭孢呋辛酯Δ2-異構(gòu)體的制備：頭孢呋辛酯對(duì) 照品+流動(dòng)相 頭孢呋辛酯Δ2-異構(gòu)體。2）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：各異構(gòu)體之間的R>1.5，以

11、 頭孢呋辛酯A異構(gòu)體計(jì)算n>1500。,3）異構(gòu)體： t‘R1 相對(duì)保留時(shí)間 r12=----- 1----被測(cè)物 t’R2 2----標(biāo)準(zhǔn)物異構(gòu)體 相對(duì)保留時(shí)間 判斷B異構(gòu)體 0.85 供試液譜圖中A異構(gòu)體的峰面積A異構(gòu)體 1.0 與A

12、、B異構(gòu)體峰面積和之比應(yīng) 為0.48~0.55。,3.頭孢氨芐中有關(guān)物質(zhì)的檢查---反相TLC法 固定相：活化后的硅膠G板置5%（V/V）正十四 烷的正己烷溶液中，展至頂部，涼干 展開(kāi)劑：0.1mol/L枸櫞酸-0.2mol/L磷酸氫二 鈉-丙酮（120：80：3） 供試液：本品 50mg/ml 對(duì)照液（1）：