β甘草酸抗炎免疫機(jī)制研究進(jìn)展

1、,,18β-甘草酸制劑抑制CHB患者肝臟炎癥的免疫機(jī)制研究,什么是肝臟炎癥？,肝臟炎癥,是由病毒、藥物或毒素等引起的肝細(xì)胞炎癥反應(yīng),是大多數(shù)會(huì)導(dǎo)致肝纖維化和肝硬化的慢性肝病發(fā)病機(jī)制的共同基礎(chǔ),是以炎癥細(xì)胞的激活和炎性細(xì)胞因子前體的產(chǎn)生為特征,,,,是以血清ALT值和組織學(xué)檢測(cè)為評(píng)估手段,,,,J Hepatol.2012,57(3):642-54,,肝臟長(zhǎng)期炎癥狀態(tài)是HBV感染患者發(fā)展為肝硬化的主要原因,Nature Medicine.

2、2013,19(7):859-68,抗炎治療在CHB的治療中非常必要,病理生理學(xué),病毒只是CHB病理學(xué)進(jìn)程的啟動(dòng)因素感染后續(xù)效應(yīng)表現(xiàn)為長(zhǎng)期和反復(fù)的炎癥反應(yīng),抗病毒藥物,核苷類(lèi)似物：抑制病毒復(fù)制干擾素：免疫調(diào)節(jié)臨床中相當(dāng)部分患者在抗病毒治療后，其ALT水平仍持續(xù)高于正常值,宿主免疫,缺乏持續(xù)強(qiáng)力的免疫應(yīng)答.,,,甘草酸制劑長(zhǎng)期被應(yīng)用于肝臟疾病的抗炎治療,2000多年前《神農(nóng)本草經(jīng)》已記載甘草。古人尊其為“藥之國(guó)老”，具調(diào)和眾藥之功；

3、1941年，全球首次提純18β-甘草酸苷；1948年，日本首先出商品化的復(fù)方甘草酸制劑；1958年，復(fù)方甘草酸制劑-美能SNMC首創(chuàng)被應(yīng)用于肝病治療；1977年，美能完成全球首個(gè)隨機(jī)雙盲安慰劑對(duì)照臨床試驗(yàn)；1998年，美能完成中國(guó)注冊(cè)臨床研究，成功上市；2015年，截止10月國(guó)內(nèi)已發(fā)表以“甘草酸”或“甘草甜素”為主題的醫(yī)學(xué)臨床研究文獻(xiàn)近10000篇（www.cnki.net）；,甘草酸制劑的抗炎療效獲得臨床認(rèn)可，被廣泛應(yīng)用于

4、肝臟相關(guān)疾病治療。,,,,SNMC 具有改善肝臟炎癥，阻止肝纖維化發(fā)生的作用,Park BK. J Gastroenterol Hepatol,2007,22:383·88,Molica L,et al.Chem Biol.2007,14(4):431-441,,Long-term use of SNMC prevent fibrosis and carcinoma in CHB patients,復(fù)方甘草酸苷（SNMC）是

5、一種在亞洲地區(qū)被廣泛應(yīng)用于臨床治療的抗炎藥物，其主要有效成分18-β甘草酸被證明能夠有效結(jié)合并抑制肝臟炎癥上游調(diào)控因子HMGB1（高遷移率族蛋白1，廣泛參與機(jī)體炎癥反應(yīng)），從而發(fā)揮抗炎療效。,RAGE,炎癥因子,IL-1βIL-18,腫瘤生長(zhǎng)/侵襲/轉(zhuǎn)移,TLR4,NFKB,炎癥,纖維化,α-SMA膠原,Foxp3,,肝細(xì)胞增殖,免疫調(diào)節(jié),Cyclin D1,18β-甘草酸苷,,結(jié)合抑制,,,,,,,,Treg 細(xì)胞,18β-甘草

6、酸苷結(jié)合抑制HMGB1的抗炎機(jī)制,J Leukoc Biol. 2007 Jan; 8（1）;100-7J Pharmacol Exp Ther. 2011 Oct; 339（1）;93-8Chen R,et al. Mol Med.2013,8(19)Kimura M, Inoue H, et al., European Journal of Pharmacology 2001.431:151-161Kroes BH, Be

7、ukelman CJ,etc. Immunology 1997,90:115-120,復(fù)方甘草酸苷改善慢性乙型肝炎患者肝臟炎癥的機(jī)制研究,目的研究復(fù)方甘草酸苷改善慢性乙型肝炎患者肝臟炎癥的機(jī)制,方法,Control（N=11）,SNMC（N=10）,Entecavir 0.5mg/day,Entecavir 0.5mg/day,Liver protection therapy*,Liver protection therapy*,+

8、,+,SNMC 200mg/day i.v.,+,14 days,*保肝治療：苦參素注射液、還原型谷胱甘肽和多烯磷脂酰膽堿注射液,,,觀察目標(biāo) 肝功能：血清ALT 血清炎癥細(xì)胞因子表達(dá)： MCP-1、IL-16、6Ckine、TPO、SCF、TSLP、IL-33、IL-20、IL- 21、IL-23、IL-28α、TRAIL、SDF-1α+β、ENA-78 （MILLIPLEX MAP Hum

9、an Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel II - Immunology Multiplex Assay） IL-18（ELISA）,,,復(fù)方甘草酸苷改善慢性乙型肝炎患者肝臟炎癥的機(jī)制研究,SNMC能夠明顯改善肝臟炎癥,ALT(U/L),**,**p<0.01,,,兩組治療前后部分細(xì)胞因子沒(méi)有顯著變化,,,,,,IL-16,6Ckine,SCF,TSLP,TPO,IL-20,（

10、pg/ml）,（pg/ml）,,,SNMC 下調(diào)MCP-2 的表達(dá),*,*p<0.05,MCP-2(pg/ml),MCP-2：?jiǎn)魏思?xì)胞趨化蛋白2（monocyte chemoattractant protein 2）,,,SNMC 誘導(dǎo)ENA-78 表達(dá),*,*p<0.05,ENA-278(pg/ml),ENA-78：上皮來(lái)源的中性粒細(xì)胞活化肽-78（epithelial cell-derived neutrophil-ac

11、tivating peptide-78）,,,MCP-2 and HMGB1,MCP-2 是體積較小的CC趨化因子家族成員之一，亦被稱為趨化因子（C-C motif）配體8（CCL8）； MCP-2 能夠趨化和激活炎癥反應(yīng)通路中許多不同的免疫細(xì)胞；據(jù)報(bào)道在骨性關(guān)節(jié)炎中的持續(xù)損傷性軟骨炎中，包括MCP-2在內(nèi)的一系列趨化因子被激活表達(dá)，而HMBG1也涉及其中；,HMGB1,,MCP-2,,Inflammation,CCR1/CCR2B

12、/CCR5,,DNA Cell Biol. 2014,33(8): 550–565.,,,ENA-78 and HMGB1,ENA-78 是體積較小的CXC 趨化因子家族成員之一，亦被稱為CXCL5；細(xì)胞在受到炎癥趨化因子白介素1或腫瘤壞死因子α刺激后產(chǎn)生ENA-78；肝組織學(xué)上具有壞死性炎癥和纖維化的患者，其血漿ENA-78處于較低水平；但ENA-78和HMBG1的相關(guān)性尚未被揭示；,J Gastroenterol Hepato

13、l,2011,26(3):523-529,,,,肝臟炎癥,HMGB1,MCP-2,總結(jié),,肝纖維化,？,,,ENA-78,,慢性乙型肝炎,復(fù)方甘草酸制劑SNMC能夠有效降低慢性乙型肝炎患者的血清ALT水平，從而改善肝功能；其主要成分18-β甘草酸能夠與炎癥上游因子HMGB1結(jié)合，從而產(chǎn)生抑制作用；其對(duì)于炎癥通路中的MCP-2和ENA-78具有調(diào)控表達(dá)的作用；抗炎免疫機(jī)制及HMBG1、MCP-2和ENA-78三者間的關(guān)系有待進(jìn)一步研

14、究；,后續(xù)研究思路,,,,復(fù)方甘草酸苷對(duì)MCP-2、ENA-78調(diào)節(jié)的研究策略，在四個(gè)層次上進(jìn)行:啟動(dòng)子DNA水平的研究：構(gòu)建MCP-2、ENA-78基因啟動(dòng)子的Luc報(bào)告基因表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染自然情況下表達(dá)MCP-2、ENA-78的不同細(xì)胞系，闡明復(fù)方甘草酸苷對(duì)于MCP-2、ENA-78基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)作用。RNA轉(zhuǎn)錄水平的研究：利用real-time PCR技術(shù)，對(duì)于復(fù)方甘草酸苷作用的細(xì)胞系表達(dá)MCP-2、ENA-78的RN

15、A水平進(jìn)行qPCR檢測(cè)，闡明美能對(duì)MCP-2、ENA-78轉(zhuǎn)錄水平是否有調(diào)節(jié)作用。蛋白水平的表達(dá)：利用特異性的單克隆抗體，針對(duì)復(fù)方甘草酸苷作用的細(xì)胞系，進(jìn)行MCP-2、ENA-78蛋白表達(dá)水平的Western blot雜交技術(shù)的檢測(cè)。闡明蛋白水平上MCP-2、ENA-78的表達(dá)，是否受到美能的調(diào)控。miRs水平的調(diào)控研究。系統(tǒng)搜索復(fù)方甘草酸苷調(diào)控的miRs類(lèi)型，以及生物信息學(xué)預(yù)測(cè)MCP-2、ENA-78的3’-UTR潛在的miRs調(diào)