β甘草酸抗炎免疫機制研究進展

1、,,18β-甘草酸制劑抑制CHB患者肝臟炎癥的免疫機制研究,什么是肝臟炎癥？,肝臟炎癥,是由病毒、藥物或毒素等引起的肝細胞炎癥反應,是大多數(shù)會導致肝纖維化和肝硬化的慢性肝病發(fā)病機制的共同基礎,是以炎癥細胞的激活和炎性細胞因子前體的產(chǎn)生為特征,,,,是以血清ALT值和組織學檢測為評估手段,,,,J Hepatol.2012,57(3):642-54,,肝臟長期炎癥狀態(tài)是HBV感染患者發(fā)展為肝硬化的主要原因,Nature Medicine.

2、2013,19(7):859-68,抗炎治療在CHB的治療中非常必要,病理生理學,病毒只是CHB病理學進程的啟動因素感染后續(xù)效應表現(xiàn)為長期和反復的炎癥反應,抗病毒藥物,核苷類似物：抑制病毒復制干擾素：免疫調節(jié)臨床中相當部分患者在抗病毒治療后，其ALT水平仍持續(xù)高于正常值,宿主免疫,缺乏持續(xù)強力的免疫應答.,,,甘草酸制劑長期被應用于肝臟疾病的抗炎治療,2000多年前《神農(nóng)本草經(jīng)》已記載甘草。古人尊其為“藥之國老”，具調和眾藥之功；

3、1941年，全球首次提純18β-甘草酸苷；1948年，日本首先出商品化的復方甘草酸制劑；1958年，復方甘草酸制劑-美能SNMC首創(chuàng)被應用于肝病治療；1977年，美能完成全球首個隨機雙盲安慰劑對照臨床試驗；1998年，美能完成中國注冊臨床研究，成功上市；2015年，截止10月國內已發(fā)表以“甘草酸”或“甘草甜素”為主題的醫(yī)學臨床研究文獻近10000篇（www.cnki.net）；,甘草酸制劑的抗炎療效獲得臨床認可，被廣泛應用于

4、肝臟相關疾病治療。,,,,SNMC 具有改善肝臟炎癥，阻止肝纖維化發(fā)生的作用,Park BK. J Gastroenterol Hepatol,2007,22:383·88,Molica L,et al.Chem Biol.2007,14(4):431-441,,Long-term use of SNMC prevent fibrosis and carcinoma in CHB patients,復方甘草酸苷（SNMC）是

5、一種在亞洲地區(qū)被廣泛應用于臨床治療的抗炎藥物，其主要有效成分18-β甘草酸被證明能夠有效結合并抑制肝臟炎癥上游調控因子HMGB1（高遷移率族蛋白1，廣泛參與機體炎癥反應），從而發(fā)揮抗炎療效。,RAGE,炎癥因子,IL-1βIL-18,腫瘤生長/侵襲/轉移,TLR4,NFKB,炎癥,纖維化,α-SMA膠原,Foxp3,,肝細胞增殖,免疫調節(jié),Cyclin D1,18β-甘草酸苷,,結合抑制,,,,,,,,Treg 細胞,18β-甘草

6、酸苷結合抑制HMGB1的抗炎機制,J Leukoc Biol. 2007 Jan; 8（1）;100-7J Pharmacol Exp Ther. 2011 Oct; 339（1）;93-8Chen R,et al. Mol Med.2013,8(19)Kimura M, Inoue H, et al., European Journal of Pharmacology 2001.431:151-161Kroes BH, Be

7、ukelman CJ,etc. Immunology 1997,90:115-120,復方甘草酸苷改善慢性乙型肝炎患者肝臟炎癥的機制研究,目的研究復方甘草酸苷改善慢性乙型肝炎患者肝臟炎癥的機制,方法,Control（N=11）,SNMC（N=10）,Entecavir 0.5mg/day,Entecavir 0.5mg/day,Liver protection therapy*,Liver protection therapy*,+

8、,+,SNMC 200mg/day i.v.,+,14 days,*保肝治療：苦參素注射液、還原型谷胱甘肽和多烯磷脂酰膽堿注射液,,,觀察目標 肝功能：血清ALT 血清炎癥細胞因子表達： MCP-1、IL-16、6Ckine、TPO、SCF、TSLP、IL-33、IL-20、IL- 21、IL-23、IL-28α、TRAIL、SDF-1α+β、ENA-78 （MILLIPLEX MAP Hum

9、an Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel II - Immunology Multiplex Assay） IL-18（ELISA）,,,復方甘草酸苷改善慢性乙型肝炎患者肝臟炎癥的機制研究,SNMC能夠明顯改善肝臟炎癥,ALT(U/L),**,**p<0.01,,,兩組治療前后部分細胞因子沒有顯著變化,,,,,,IL-16,6Ckine,SCF,TSLP,TPO,IL-20,（

10、pg/ml）,（pg/ml）,,,SNMC 下調MCP-2 的表達,*,*p<0.05,MCP-2(pg/ml),MCP-2：單核細胞趨化蛋白2（monocyte chemoattractant protein 2）,,,SNMC 誘導ENA-78 表達,*,*p<0.05,ENA-278(pg/ml),ENA-78：上皮來源的中性粒細胞活化肽-78（epithelial cell-derived neutrophil-ac

11、tivating peptide-78）,,,MCP-2 and HMGB1,MCP-2 是體積較小的CC趨化因子家族成員之一，亦被稱為趨化因子（C-C motif）配體8（CCL8）； MCP-2 能夠趨化和激活炎癥反應通路中許多不同的免疫細胞；據(jù)報道在骨性關節(jié)炎中的持續(xù)損傷性軟骨炎中，包括MCP-2在內的一系列趨化因子被激活表達，而HMBG1也涉及其中；,HMGB1,,MCP-2,,Inflammation,CCR1/CCR2B

12、/CCR5,,DNA Cell Biol. 2014,33(8): 550–565.,,,ENA-78 and HMGB1,ENA-78 是體積較小的CXC 趨化因子家族成員之一，亦被稱為CXCL5；細胞在受到炎癥趨化因子白介素1或腫瘤壞死因子α刺激后產(chǎn)生ENA-78；肝組織學上具有壞死性炎癥和纖維化的患者，其血漿ENA-78處于較低水平；但ENA-78和HMBG1的相關性尚未被揭示；,J Gastroenterol Hepato

13、l,2011,26(3):523-529,,,,肝臟炎癥,HMGB1,MCP-2,總結,,肝纖維化,？,,,ENA-78,,慢性乙型肝炎,復方甘草酸制劑SNMC能夠有效降低慢性乙型肝炎患者的血清ALT水平，從而改善肝功能；其主要成分18-β甘草酸能夠與炎癥上游因子HMGB1結合，從而產(chǎn)生抑制作用；其對于炎癥通路中的MCP-2和ENA-78具有調控表達的作用；抗炎免疫機制及HMBG1、MCP-2和ENA-78三者間的關系有待進一步研

14、究；,后續(xù)研究思路,,,,復方甘草酸苷對MCP-2、ENA-78調節(jié)的研究策略，在四個層次上進行:啟動子DNA水平的研究：構建MCP-2、ENA-78基因啟動子的Luc報告基因表達載體，轉染自然情況下表達MCP-2、ENA-78的不同細胞系，闡明復方甘草酸苷對于MCP-2、ENA-78基因啟動子轉錄活性的調節(jié)作用。RNA轉錄水平的研究：利用real-time PCR技術，對于復方甘草酸苷作用的細胞系表達MCP-2、ENA-78的RN

15、A水平進行qPCR檢測，闡明美能對MCP-2、ENA-78轉錄水平是否有調節(jié)作用。蛋白水平的表達：利用特異性的單克隆抗體，針對復方甘草酸苷作用的細胞系，進行MCP-2、ENA-78蛋白表達水平的Western blot雜交技術的檢測。闡明蛋白水平上MCP-2、ENA-78的表達，是否受到美能的調控。miRs水平的調控研究。系統(tǒng)搜索復方甘草酸苷調控的miRs類型，以及生物信息學預測MCP-2、ENA-78的3’-UTR潛在的miRs調