小鼠海馬ltp

1、一背景知識(shí)一背景知識(shí)Mris水迷宮實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)動(dòng)物空間學(xué)習(xí)記憶功能的重要行為學(xué)方法，海馬LTP實(shí)驗(yàn)可以了解突觸可塑性變化，反映行為學(xué)的發(fā)生機(jī)制。腦片是指從動(dòng)物腦區(qū)制備的厚度為100~700μm能夠在體外存活一定的時(shí)間的腦薄片，腦片技術(shù)起始于20世紀(jì)50年代Li和McIlwain的離體腦片電生理研究。腦片兼有在體腦實(shí)驗(yàn)和離體神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)的某些特點(diǎn)，在體外48小時(shí)內(nèi)依然能保持良好的活性，離子通道性質(zhì)不會(huì)發(fā)生變化，離體腦片保持有完整的神經(jīng)突起和

2、神經(jīng)解剖通路，便于研究突觸活性。在腦片的電生理過程中排除了活體血壓、溫度、電解質(zhì)、血腦屏障等因素的干擾，可以按不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹苯訙?zhǔn)確地改變腦片灌流液的成份和條件，如溫度、酸度和滲透壓、通氧狀態(tài)、以及離子通道或細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的阻斷劑等；還能借助顯微鏡準(zhǔn)確地放置記錄電極和刺激電極。維持腦片活性有兩種不同的技術(shù)：交界式腦片孵育：腦片部分浸入人工腦脊液（ACSF）中，上表面暴露在濕化的含95%O2和5%CO2的氣體，這種孵育方式，腦片得到氧氣

3、是通過氧氣在腦片上表面的擴(kuò)散；全浸式腦片孵育：腦片全部浸入在人工腦脊液中，在這種孵育方式中，腦片是從溶解在人工腦脊液中得到氧氣。孵育腦片方式的選用取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。例如?dāng)采用共聚焦成像技術(shù)時(shí)采用全浸式腦片孵育。這兩種不同的腦片孵育方式對(duì)腦片的細(xì)胞生理有不同的影響，例如，最近研究發(fā)現(xiàn)α鈣調(diào)蛋白依賴性激酶??的磷酸化，這種酶在LTP誘導(dǎo)中起關(guān)鍵作用，在全浸式腦片中短暫升高，引起細(xì)胞的癲癇樣放電，你可以把一片剃須刀片從中間折斷成兩片，然后取一小

4、截刀刃，插到一根棉簽?zāi)竟魃蟻砬袛?。二腦片制備方法二腦片制備方法1.取C57小鼠，用乙醚麻醉后快速斷頭，切開頭皮去除顱骨和硬腦膜。迅速取出全腦置于0~4℃且用95％的02和5％的C02飽和的人工腦脊液(ACSF)中稍加冷卻，其成分為(mmol／L)NaCl120，KCl2.5，CaCl22.0，NaH2PO41.25，NaHC0326，MgS042.0，葡萄糖10，氧飽和后，pH為7.4。2.切去小腦和1／3前腦，將大腦沿正中線一分為二，

5、由腦腹內(nèi)側(cè)沿皮質(zhì)邊緣分出海馬，用膠水將含有海馬的腦組織塊固定在載物浴碟上。3.用振動(dòng)切片機(jī)冠狀面切厚度為400微米的腦片。4.將腦片放在孵育槽中浸在液面下的尼龍網(wǎng)上，不斷充以混合氣，并置于34℃恒溫水浴槽中孵育05h，然后置于室溫(261)℃孵育待用，2～3h后開始實(shí)驗(yàn)。三離體腦片電位記錄三離體腦片電位記錄1.實(shí)驗(yàn)時(shí)取1個(gè)孵育后的腦片置于半浸式恒溫浴槽的尼龍網(wǎng)上，浴槽內(nèi)恒溫32℃。腦片上方持續(xù)通入95％02和5％C02混合氣體，腦片下方