質(zhì)粒載體分類及閱讀

1、質(zhì)粒載體分類及閱讀一.九種表達(dá)載體PllpOmpApllpSTIIpMBPPpMBPCpETGSTpETTrxpETHispETCKSpETDsbA二.克隆載體pTZ19RDNApUC57DNAPMD18TPQE30pUC18pUC19pTrcHisApTrxFuspRSETApRSETBpVAX1PBR322pbv220pBlueIIKS()L4440pCAMBIA1301pMALp2XpGD926三.PET系列表達(dá)載體Protein

2、ExpressionProkaryoticExpressionpETDsbFusionSystems39b40bProteinExpressionProkaryoticExpressionpETExpressionSystem33bProteinExpressionProkaryoticExpressionpETExpressionSystemsProteinExpressionProkaryoticExpressionpETExpre

3、ssionSystemsplusCompetentCellsProteinExpressionProkaryoticExpressionpETGSTFusionSystems4142ProteinExpressionProkaryoticExpressionpETNusAFusionSystems43.144ProteinExpressionProkaryoticExpressionpETVectDNAProteinPurificati

4、onPurificationSystemsStrep?TactinResinsPurificationKits四.PGEX系列表達(dá)載體TEc?pGEX1IBAPpGEX2TpGEX2TK（1）Ampr水解β－內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。（2）tetr可以阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞。（3）camr生成氯霉素羥乙?；苌?，使之失去毒性。（4）ne（kanr）氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶使G418（長(zhǎng)那霉素衍生物）失活（5）hygr使潮霉素β失活。第三步：看多

5、克隆位點(diǎn)（MCS）。它具有多個(gè)限制酶的單一切點(diǎn)。便于外源基因的插入。如果在這些位點(diǎn)外有外源基因的插入，會(huì)導(dǎo)致某種標(biāo)志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。第四步：再看外源DNA插入片段大小。質(zhì)粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段。一般來說，外源DNA片段越長(zhǎng)，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低。第五步：是否含有表達(dá)系統(tǒng)元件，即啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)。這是用來區(qū)別克隆載體與表達(dá)載體。

6、克隆載體中加入一些與表達(dá)調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達(dá)載體。選用那種載體，還是要以實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑闇?zhǔn)繩。啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)啟動(dòng)子－促進(jìn)DNA轉(zhuǎn)錄的DNA順序，這個(gè)DNA區(qū)域常在基因或操縱子編碼順序的上游，是DNA分子上可以與RNApol特異性結(jié)合并使之開始轉(zhuǎn)錄的部位，但啟動(dòng)子本身不被轉(zhuǎn)錄。?增強(qiáng)子沉默子－為真核?基因組（包括真核病毒基因組）中的一種具有增強(qiáng)鄰近基因轉(zhuǎn)錄過程的調(diào)控順序。其作用與增強(qiáng)子所在的位置或方向無關(guān)。即

7、在所調(diào)控基因上游或下游均可發(fā)揮作用。沉默子－負(fù)增強(qiáng)子，負(fù)調(diào)控序列。核糖體結(jié)合位點(diǎn)起始密碼SD序列（RbsAGUSDs）：mRNA有核糖體的兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)于原核而言是AUG（起始密碼）和SD序列。?轉(zhuǎn)錄終止順序（終止子）翻譯終止密碼子：結(jié)構(gòu)基因的最后一個(gè)外顯子中有一個(gè)AATAAA的保守序列，此位點(diǎn)down－stream有一段GT或T富豐區(qū)，這2部分共同構(gòu)成poly（A）加尾信號(hào)。結(jié)構(gòu)基因的最后一個(gè)外顯子中有一個(gè)AATAAA的保守序列，此

8、位點(diǎn)down－stream有一段GT或T富豐區(qū)，這2部分共同構(gòu)成poly（A）加尾信號(hào)。?回答有人之前提出的一個(gè)問題：為什么質(zhì)粒圖譜上有的箭頭順時(shí)針有的箭頭逆時(shí)針，那其實(shí)是代表兩條DNA鏈，即質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈DNA，它的啟動(dòng)子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上.三、介紹一下關(guān)于載體的知識(shí)（雖然課本上都有寫）1.什么是載體即要把一個(gè)有用的基因（目的基因——研究或應(yīng)用基因）通過基因工程手段送到生物細(xì)胞（受體細(xì)胞），需要運(yùn)載工具（交通