創(chuàng)傷弧菌膿毒癥大鼠肝細(xì)胞凋亡基因的表達(dá)及抗菌藥物干預(yù).pdf

1、目的：研究創(chuàng)傷弧菌致膿毒癥大鼠肝細(xì)胞凋亡基因Fas、Bcl-2和Bax的基因表達(dá)及抗菌藥物頭孢哌酮鈉和乳酸左旋氧氟沙星聯(lián)合治療的影響。 方法： 1.清潔級雄性SD大鼠110只，隨機(jī)分11組，每組10只，第1組：正常對照組(NC組)。第2～6組：創(chuàng)傷弧菌膿毒癥組(VV組)，予雙下肢皮下注射創(chuàng)傷弧菌(濃度為9×108cfu/ml，劑量為1ml/100g)，構(gòu)建創(chuàng)傷弧菌膿毒癥模型。該組大鼠分別在注射創(chuàng)傷弧菌2h、6h、9h、1

2、2h、16h時活殺，各時相點(diǎn)動物數(shù)均為10只。第7～11組：創(chuàng)傷弧菌膿毒癥聯(lián)用抗菌藥物干預(yù)組(AA組)，予雙下肢皮下注射創(chuàng)傷弧菌(濃度、劑量同上)從注射創(chuàng)傷弧菌6h起，予腹腔注射(ip)頭孢哌酮鈉(180mg/kg)和乳酸左氧氟沙星(18mg/kg)，每日2次，分別在注射創(chuàng)傷弧菌后9h、12h、16h、36h、2w時活殺，各時相點(diǎn)動物數(shù)均為10只。無菌取部分肝組織于液氮中保存待用。 2.采用Trizol試劑提取各組大鼠肝組織總R

3、NA，紫外分光光度計測定RNA濃度，以總RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。然后以cDNA為模板，以大鼠Fas，Bcl-2，Bax引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果用凝膠成像系統(tǒng)成像，QuanityOne分析軟件進(jìn)行分析，以(目的基因/β-actin)為該基因表達(dá)的相對值。 3.計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS11.5進(jìn)行t檢驗(yàn)、方差分析等處理。P＜0.05為差異有顯著性意義。

4、結(jié)果： 1.正常大鼠肝細(xì)胞有FasmRNA表達(dá)，VV組各組大鼠肝細(xì)胞FasmRNA表達(dá)量明顯高于NC對照組(P＜0.05)，有顯著性差異，以染菌后2h、6h的表達(dá)量最高，在染菌16h的表達(dá)量仍明顯高于正常水平。從組大鼠在染菌后各時間點(diǎn)FasmRNA表達(dá)量與NC對照組無差別(P＞0.05)，與相同時間點(diǎn)VV組相比，均明顯降低(P＜0.05)。 2.正常大鼠肝細(xì)胞可檢測出Bcl-2mRNA表達(dá)，VV組各組大鼠肝細(xì)胞的Bcl-

5、2mRNA表達(dá)量分別與NC對照組相比，均明顯降低(P＜0.05)。從組大鼠在染菌后9hBcl-2mRNA表達(dá)量與NC對照組無差別，12h達(dá)高峰。與相同時間點(diǎn)VV組相比，均明顯增高(P＜0.05)。 3.正常大鼠肝細(xì)胞有BaxmRNA表達(dá)，VV組各組大鼠肝細(xì)胞BaxmRNA表達(dá)量與NC對照組相比，均明顯增高(P＜0.05)。染菌后2h開始明顯增高，在染菌16h的表達(dá)量仍明顯高于對照組。AA組大鼠在染菌后9hBaxmRNA表達(dá)量與N

6、C對照組和VV組無差別(P＞0.05)。但在給予干預(yù)后12h、16h其表達(dá)量與相同時間點(diǎn)VV組相比，均明顯降低(P＜0.05)。 4.正常大鼠肝細(xì)胞中Bcl-2mRNA/BaxmRNA為(0.758±0.424)。VV組各組大鼠Bcl-2mRNA/BaxmRNA比值與NC對照組相比明顯下降(P＜0.05)，有顯著差異性。AA組大鼠染菌后肝細(xì)胞9hBcl-2mRNA/BaxmRNA比值明顯增高，與相同時間點(diǎn)VV組相比，AA組大鼠染

7、菌9h和12h肝細(xì)胞Bcl-2mRNA/BaxmRNA顯著增高(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.創(chuàng)傷弧菌膿毒癥大鼠肝細(xì)胞Fas、BaxmRNA表達(dá)量在膿毒癥早期即明顯增高，并持續(xù)維持在高水平；Bcl-2mRNA表達(dá)量則在膿毒癥早期明顯下降，并且在膿毒癥過程中持續(xù)較低水平。 2.頭孢哌酮鈉和乳酸左氧氟沙星聯(lián)合治療創(chuàng)傷弧菌膿毒癥可間接的下調(diào)凋亡基因的表達(dá)，上調(diào)凋亡抑制基因，減少肝細(xì)胞的凋亡。盡早使用頭孢哌酮鈉和乳酸左氧