風濕病的常用免疫學檢查及臨床應用

1、風濕病的常用免疫學檢查及臨床應用,概 述,多數(shù)風濕病的發(fā)病機制都與免疫失調有關， 因此檢測自身抗體（抗細胞內、細胞表面和細胞外抗原的免疫球蛋白。）、補體、 淋巴細胞及其它免疫學成份有助于許多疾病的診斷、治療和療效判斷。對檢驗結果的判斷必須密切結合臨床，并進行綜合分析。,抗核抗體(ANA）,是指抗細胞核成分的抗體，換言之是指一組對細胞核內 DNA 、RNA、蛋白質、或這些物質的分子復合物的自身抗體。,一、核的組成及其抗原性,細胞核

2、是由核膜、核仁、染色質和核液組成。核膜為雙層脂質結構， 膜孔和內層的蛋白具有抗原性，間接免疫熒光 檢查出現(xiàn)周邊核染色。核仁抗原包括核糖體蛋白、U3及Th小RNA s， PM-Scl抗原和核仁的Ku蛋白及增殖細胞核抗原（PCNA）。染色質是由DNA和組蛋白組成，它排列的基本結構亞單位為核小體數(shù)百種非組蛋白， 它們具有結構維持、基因表達及酶的作用，都是免疫反應潛在的目標，,二、檢測方法,對流免疫電泳（ＣＩＥ）間接免疫熒光（ＩＦ）

3、放射免疫（ＲＩＡ）免疫印跡（ＩＢＴ）酶聯(lián)免疫吸咐試驗（ＥＬＩＳＡ）,三、抗核抗體的種類及臨床意義,1954年Hargrave發(fā)現(xiàn)SLE 病人血液中的LE細胞, 它是抗核抗體譜檢查的起源, 它所針對的核抗原是DNA-主蛋白(DNP)，目前已采用了簡易和迅速的抗DNP抗體測定取代LE 細胞的檢查。它的陽性率在未治SLE中50-85％（＋），RA 10 ％（＋），PSS、PM/DM 及藥物過敏等均有（＋）。,（一）分型,H．均質型：與

4、組蛋白和抗DNA抗體有關，見于SLE, 藥物性狼瘡S．斑點型： 與抗ENA抗體有關，見于CTDP．周邊型 與抗DNA抗體有關，見于SLEC．著絲點型 與DNA蛋白結合體有關，為CREST 綜合征的標記性抗體 N．核仁型 與抗4-6sRNA有關，見于PSS 不同的底物ANA的陽性率不同。,國際以Hep-2作為基質,━━━━━━━━━━━━━━

5、 SLE PSS ━━━━━━━━━━━━━━ HEP-2 95％ 70％ 鼠肝 85％ 50％ ━━━━━━━━━━━━━━,（二）分類,1、ds-DNA檢測━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Farr（RIA） 結合力＞20％（＋）

6、＞30％ SLE TE（馬疫錐蟲） 1：5（＋） 1：10 SLE ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━,抗ds-DNA抗體是SLE的重要抗體。 40-60％的SLE抗ds-DNA 抗體陽性,特別是活動性SLE和狼瘡腎， 其它風濕性疾病則陽性率很低。,2、抗Histon抗體,不同疾病中的陽性率（ELISA）藥物性狼瘡 約為95％

7、 SLE 50－70％ PM/DM 13％RA 23％ 服INH 53％SS 30％ 服他巴唑 20％PSS 27％ 服苯妥因鈉 18％,3、抗ENA抗體,常見七種常見的ENA抗體α-SM（病人名）α-J0-1（病人名John）α-RNP（nRNA）α-PM-

8、1（polymyositis）α-SS-A（病名） α-Scl-70（sclerederma）α-SS-B（病名）,抗Sm抗體,僅在SLE中出現(xiàn)的陽性率為25％左右，它是SLE的標記性抗體， 它對早期，不典型SLE及治療緩解后SLE的回顧性診斷有很大幫助,抗nRNP抗體,在多種風濕病中出現(xiàn)，常與雙手腫脹，雷諾氏現(xiàn)象，指端硬化相關。當抗nRNP 陽性而同時抗dsDNA陰性，則腎病發(fā)生率較低。在METD中幾乎100 ％陽性,抗SS-A

9、/Ro抗體,在原發(fā)SS中70-80％（＋），SLE 40％（＋），RA 20％（＋）。以鼠肝為底物的ANA檢測中，抗SS-A抗體常呈陰性反應， 用免疫印跡法檢測時它可與60KD 和52KD 兩條蛋白多肽反應，作者及一些文獻都認為60KD的多肽在SLE中較SS更多見。進一步的研究表明抗SS-A抗體與新生兒狼瘡，先天性房室傳導阻滯，光敏感相關。,抗SS-B/La抗體,在原發(fā)SS中50-60％（＋），SLE 10％（＋）故有人稱抗SS-B抗

10、體是SS的標記性抗體。,抗RIB抗體（ribosome RNP),在SLE中24％（＋），且常常在活動期SLE中存在，但不隨病情的緩解而消失， 可持續(xù)1~2年?？筊IP抗體與LN和NP較密切, 有報導說與在RIP陽性的SLE中37%發(fā)生NP，而RIP陰性的SLE中僅次16%發(fā)生NP，兩者有顯著差異,抗PCNA(proliferating cell nuclear antigen)抗體,針對的是36Kd的DNA 聚合酶副蛋白，在SLE中2

11、-10％（＋), 而在其它結締組織病中陰性。,抗Pm-1抗體,在PM/DM 中8-15％(+) , 在PSS中3％(+)。在PM與PSS重疊且伴有腎炎的病人中，陽性率可高達80%,抗Jo-1抗體,在PM中25-30％（＋) ，合并肺間質病變時其陽性率可高達60%，被視為PM的標記性抗體。如患者有發(fā)熱，對稱性關節(jié)炎，“工藝手”，雷諾氏現(xiàn)象及肌炎并肺間質病變，抗Jo-1抗體常陽性，此時稱之為抗Jo-1抗體綜合癥,抗Scl-70抗體,在PS

12、S中30~40％（＋) ，是PSS 的標記抗體。有報道抗Scl-70抗體陽性的PSS患者肺纖維化的發(fā)生率是抗Scl-70抗體陰性患者的10倍。,抗Ku抗體,在SLE, MCTD, PSS中30-50％（＋），DM中僅5％（＋）。,抗Ki抗體和抗Mi-2,抗Ki抗體在SLE中8-20％（＋）, 其價值不明。在其它風濕病中僅很低的陽性率。抗Mi-2抗體在PM中5％（＋）,抗 RA33抗體,在RA中36%（+），尤其是早期RA血清中。有人隨

13、訪了 抗 RA33抗體陽性又未能確診的關節(jié)炎，結果大部分病人在8~24個月后均發(fā)生典型的RA。另需注意的是u1RNP可能與RA33有交叉反應，且抗 RA33抗體的消長與病情和用藥無關。 （1989年Hassfeld首次報道）,總之檢測抗核抗體的意義就在于幫助一些疾病的診斷（有些抗 核抗體有較高診斷特異性），觀察治療反應，判斷疾病的活動性。（不同抗體不同對待，如RNP,Sm就與活動性無關）。,疾病與抗核抗體關系,A－dsDNA

14、 SLE A-sm SLE A-scl-70 PSS A-Centromere CREST A-Jo-1 PM A-Pm-1 PM/DM A-SSB SS A-SSA

15、 SS. SLE A-RNP MCTD. CTD A-P蛋白 SLE,抗磷脂抗體（APL),抗磷脂抗體包括狼瘡抗凝因子和一組抗負電磷脂抗體目前應用最多的是抗心磷脂抗體(AcL)，它有IgG、IgM和IgA 三種成份，IgG更具特異性，而IgA最不具特異。Acl與HLADR、DQ及C4有關。在SLE患者的AcL陽性率是33－44％（ELISA法），在合

16、并有網狀青紫或中樞神經病變的SLE其陽性率達80％ 或90％，在其它風濕病，如 PSS、RA、SS和MCTD中陽性率分別是23％、15％、10％和14％。AcL 與反復動脈、靜脈血栓、習慣性流產、血小板減少以及神經系統(tǒng)癥狀密切相關，是診斷抗磷脂抗體綜合征（APS）不可缺少的指標。（1957年Conley 首次報道）,抗內皮細胞抗體（AECA）,是一種針對內皮細胞膜蛋白的抗體。在SLE中的陽性率約14-85％， 也可出現(xiàn)于RA、MCTD

17、、SS以及一些血管炎疾病如Wegener's肉芽腫、 多 動脈炎、Behcet's病以及kawasaki疾病中。IgG、IgM亞類的AECA 與疾 病活動性顯著相關，AECA與血管損傷密切相關，尤其是腎臟累及時。當血管炎發(fā)作緩解，則AECA滴度下降。,抗中性粒細胞漿抗體(ANCA),是一種與中性粒細胞或單核細胞胞漿中的溶酶體酶起反應的抗體。ANCA 可分為胞漿型ANCA(cANCA)和核周型ANCA(pANCA)，其滴度

18、常與病情活動相關cANCA抗原主要為顆粒中的蛋白酶－３（PR 3 -protlinase），pANCA抗原主要為髓過氧化酶（Hyploperoxidase,MPO)。８０％韋格氏肉芽腫病人血清中有cANCA，特異性為90％。 少數(shù)巨細胞動脈炎、大動脈炎、過敏性紫癜、白細胞破碎性皮膚性血管炎和白塞病等cANCA也可陽性。pANCA不如cANCA具有診斷特異性，在鏡下多動脈炎、Churg-sttrauss及其它自身免疫性疾病（硬化性膽管炎、

19、潰瘍性，結腸炎、肝炎、狼瘡、類風關、干燥等）中均能出現(xiàn)。ANCA可能參與血管炎的發(fā)病。,類風濕因子(RF),RF是抗人或動物IgG分子FC片段的抗體，它不僅能與變性的IgG 反應， 也能與自身的或異體的IgG反應， 還能與其它抗原如核蛋白發(fā)生交叉反應。按照抗免疫球蛋白類型分為IgM-RF，IgG-RF和IgA-RF三種，后種分子不易于其它非相關抗原反應，故特異性較強，具有更高的診斷價值。,如今最常用于檢測RF的方法仍是乳膠凝集法(Ig

20、M型)，RA 患者中陽性率 可達80％，如乳膠法RF陰性，臨床高疑RA，可用ELISA測IgG和IgA型RF。 一般抗體滴度越高，關節(jié)外的表現(xiàn)越重，疾病越活動，預后越差。在5％的正常老人，其它風濕病、細菌性心內膜炎、結核、肝炎、肺纖維化等多種疾病中都可出現(xiàn)不同比例、低滴度的RF陽性（除干燥綜合征癥為高 滴度）。此外RF檢測是劃分血清陰性關節(jié)炎是重要標準。,淋巴細胞分型(lymphocyte typy),淋巴細胞由T、B二類組成，它們是免

21、疫反應中的重要物質基礎。在免疫系統(tǒng)中，B淋巴細胞執(zhí)行特異體液免疫功能，T淋巴細胞則執(zhí)行特異 細胞免疫和免疫調節(jié)功能。因此這二類細胞的數(shù)目及功能異常均可導致免疫學異常。,淋巴細胞表面表達多種蛋白分子，有些只暫時出現(xiàn)在細胞發(fā)育的某一階段，有些表達于全部細胞表面，有些分子只表達于特定功能亞群的T或B細胞表面，故稱之為分化抗原。 這些分子均可被相應單克隆抗體識別，從而將T、B淋巴細胞分成許多成熟度和活性不同的亞型。,部分分化抗原命名的T、B細胞

22、,分化抗原 分子量 分布及特點 意 義CD1 21/48 不成熟T細胞 血液病↑CD3 20/20/25 成熟T細胞 自身免疫病、SLE、RA↑CD4 55 輔助T細胞 免疫活躍↑、免疫缺陷↓CD8

23、 30/45 殺傷/抑制T細胞 SLE↓CD25 50-55 IL-2受體α鏈 自身免疫病↑CD45RO 80 記憶T細胞 同上，尤其是RACD19 95 早期B細胞 急性淋巴細胞白血病↑CD21 1

24、40 略成熟B細胞 自身免疫病↑CD22 135 成熟B細胞,與T 同上 細胞有協(xié)同作用,細胞因子(cytokine),細胞因子是活細胞分泌的具有生物活性的多肽/蛋白產物，是免疫調節(jié)中不可缺少的物質，同時也參與炎癥反應。根據(jù)來源分成淋巴因子 和單核因子兩

25、類，其中以T細胞產生最多，研究結果最明確， 生物學意義最明顯。如IL1-15、IF2，單核因子主要指IL1、IL6及TNF。共同 的特性是：多效性、多源性、快速反應性及致熱原性。,細胞因子與意義,細胞因子 來源 意 義IL-1 單核、膠質、T細胞、內皮 誘導IL-2、活化淋巴細胞、

26、 致炎、抗癌 IL-2 THS細胞、胸腺細胞 促進細胞因子、IgG分泌、活

27、 化NK和巨噬細胞、剌激T、B 細胞增殖

28、 IL-6 單核、內皮細胞、瘤細胞 誘導B細胞增殖、致炎、抗癌TNF 單核、內皮 抗腫瘤、致炎 IF(αβγ) 白細胞、成纖維細胞、 抗病毒、抗癌及免疫調節(jié) T細胞