長(zhǎng)興吊瓜籽油脂肪酸組成分析和毒理學(xué)初步評(píng)價(jià)

1、長(zhǎng)興吊瓜籽油脂肪酸組成分析和毒理學(xué)初步評(píng)價(jià)長(zhǎng)興吊瓜籽油脂肪酸組成分析和毒理學(xué)初步評(píng)價(jià)1王亞萍1楊柳2朱光權(quán)3石從廣3（中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院亞熱帶林業(yè)研究所1，杭州311400）（浙江省林產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)站2，杭州310023）（浙江省林業(yè)科學(xué)研究院3，杭州310023）摘要對(duì)長(zhǎng)興吊瓜（Trichosanthesbracteata）籽油中脂肪酸組分進(jìn)行了分析，并對(duì)其食用安全性進(jìn)行了毒理學(xué)評(píng)估。吊瓜籽油經(jīng)甲酯化處理后采用氣質(zhì)聯(lián)用（GCMS）對(duì)其脂

2、肪酸組分進(jìn)行了分離、并通過(guò)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照對(duì)其主要脂肪酸進(jìn)行定性分析，采用氣相色譜(GCFID)對(duì)這些脂肪酸組分進(jìn)行定量測(cè)定。通過(guò)小鼠試驗(yàn)進(jìn)行毒理學(xué)評(píng)價(jià)，包括小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)和慢性毒性三項(xiàng)。結(jié)果表明，吊瓜籽油中脂肪酸主要有油酸、亞油酸、栝樓酸等7種，不飽和脂肪酸含量達(dá)89.9%，其特有的栝樓酸（十八碳三烯酸）達(dá)25.4%。毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果顯示LD50值高達(dá)40mLkg以上，慢性毒性三項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果均為陰性，表明吊瓜籽油實(shí)際無(wú)毒

3、。可見(jiàn)，富含栝樓酸的吊瓜子油有望開(kāi)發(fā)成新資源食品。關(guān)鍵詞長(zhǎng)興吊瓜籽脂肪酸組成質(zhì)譜氣相色譜急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)慢性毒性三項(xiàng)試驗(yàn)中圖分類(lèi)號(hào)：S38文獻(xiàn)標(biāo)志碼：文章編號(hào)：FattyAcidCompositionAnalysisToxicologyPreliminaryevaluationofTrichosanthesbracteataseedoilWangYaping1YangLiu2ZhuGuangquan3ShiCongguang3(theR

4、esearchInstituteofSubtropicalFestryCAF1FuyangZhejiang311400)(Zhejiangqualitytestingstationoffestryproduct2Hangzhou310023)(Zhejiangfestacademy3Hangzhou310023)AbstractCrudeoilofTrichosanthesbracteata(‘ChangxingTrichosanthe

5、s’)seedwasextractedafterdealingwithmethylesterificationtodeterminethefattyacidcompositionbygaschromatographymassspectrometry(GCMS)methodthe7majfattyacidswereidentifiedbyretrievalingmassspectrometrydatabasescomparingstard

6、substances.Usinggaschromatography(GCFID)toquantitativelydeterminethefattyacidcompositiontheresultsshowedthatthecontentofunsaturatedfattyacidsreachedto89.9%theuniquetrichosanicacidis25.4%.Crudeoilof‘ChangxingTrichosanthes

7、’seedwasfilteredtoconductcontinuoustoxicologicalevaluationtestincludingmouseacutealtoxicitytestthreechronictoxicityteststheresultsshowedthattheLD50valuewasmethan40mLkgtheresultsofthreechronictoxicitytestswerenegativewhic

8、hindicatedthattheoilwasactuallynontoxic.Therefecombinedwithpeopleslongtermconsumptioncustom‘ChangxingTrichosanthes’seedoilisexpectedtobedevelopedasanewresourcefood.收稿日期：20180314作者簡(jiǎn)介：王亞萍，女，1978年出生，助理研究員，經(jīng)濟(jì)林產(chǎn)品采后利用及質(zhì)量控制通訊作者

9、：石從廣，男，1980年出生，副研究員，林木種質(zhì)資源和遺傳改良取1滴（約0.1g）吊瓜籽油脂，加入5mL異辛烷，待充分溶解加入1molL的KOH甲醇溶液0.2mL、搖勻，甲酯化處理5min，然后加入硫氰酸鉀試劑1g，振蕩后靜置待分層、取上清液供GCMS、GCFID分析。1.2.4脂肪酸GCMS分析色譜條件：進(jìn)樣口溫度為230℃，分流比為25:1。色譜柱為HPINNOWAX石英毛細(xì)管柱（30m0.32mm0.25μm），載氣為高純氦氣，恒

10、流模式，流速為1mLmin。柱溫初始溫度50℃保持1min，以10℃min升溫至250℃，保持5min。FID檢測(cè)器溫度為250℃，氫氣40mLmin，空氣400mLmin，補(bǔ)充氣氮?dú)?0mLmin。質(zhì)譜條件：GCMS接口溫度280℃，電子轟擊（EI）離子源，電離能量70eV，離子源溫度230℃，四極桿溫度150℃，掃描周期為2.84次s，質(zhì)量掃描范圍為mz為35～500。1.2.5定性與定量脂肪酸甲酯化樣品經(jīng)GCMS分析，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)

11、照和質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，并結(jié)合特征離子對(duì)各組分進(jìn)行定性分析；脂肪酸甲酯化樣品經(jīng)GCFID分析，同時(shí)按峰面積歸一法對(duì)各組分進(jìn)行百分比定量測(cè)定，6次重復(fù)。1.3毒理學(xué)試驗(yàn)1.3.1樣品及處理吊瓜籽油脂樣品為淡綠色油狀物，實(shí)驗(yàn)時(shí)以色拉油作溶媒配制成不同濃度的樣品液供試。實(shí)驗(yàn)用ICR小鼠由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，屬清潔級(jí)，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（浙）20140001，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK（浙）20110166。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料由浙

12、江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)GB14925—2010。檢測(cè)環(huán)境條件，溫度范圍20～25℃，相對(duì)濕度范圍40%70%。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)前在動(dòng)物房環(huán)境中適應(yīng)3～5d。1.3.2小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)參考《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》[17]和GB15193.1—2014，各劑量組濃度有所調(diào)整。選用健康、成熟，體重18～22gICR小鼠20只，雌雄各半。1.3.3慢性三項(xiàng)毒性試驗(yàn)Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)用ICR小鼠

13、由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重2530g。雌雄小鼠隨機(jī)分組，設(shè)5個(gè)體重劑量組，檢測(cè)依據(jù)為《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》[17]，分別參考GB15193.1—2014第4，5，7條。1.3.3.1Ames試驗(yàn)菌株選用組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門(mén)氏菌，共4株，即TA97a；TA98、TA100、TA102，由上海市疾病預(yù)防控制中心提供，經(jīng)生物學(xué)鑒定合格后進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)采用平板摻入法，稱(chēng)取樣品0.50g于研缽中以DMSO研磨至10.0mL，

14、于0.103MPa、105℃滅菌20min，以滅菌蒸餾水梯度稀釋至各設(shè)定劑量。用TA100菌株的非代謝活化系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，劑量為5000μg皿時(shí)未出現(xiàn)明顯的增菌和抑菌現(xiàn)象，故試驗(yàn)時(shí)選擇試驗(yàn)濃度為8μg、40μg、200μg、1000μg、5000μg皿5個(gè)劑量組，另設(shè)空白對(duì)照、溶劑對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照組，每種菌株每個(gè)測(cè)試濃度設(shè)3皿平行，分別在加和不加S9條件下進(jìn)行試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)一次。試驗(yàn)后直接計(jì)數(shù)培養(yǎng)基上各菌株的回變菌落數(shù)。1.3.3.2小鼠