等位酶標記

1、380等位酶標記等位酶標記382距離，從而分辨出不同類型的亞基。反過來，根據(jù)酶譜上分離出來的各個亞基的不同表現(xiàn)（遷移距離相等或者不等），就可以確定該個體在該位點上是純合體還是雜合體（圖1）。等位酶標記第一次用比較簡單而直觀的方法識別出了大量的基因位點和每個位點的等位基因，能夠定量地考察遺傳變異。等位酶標記是一個共顯性標記（codominance即能夠區(qū)分雜合子Aa和顯性純合子AA），從酶譜上可以直接確定編碼該等位酶的等位基因，而且等位酶

2、的遺傳和表達都遵循孟德爾定律。等位酶分析的成本相對較低，方法也比較簡單。等位酶分析方法有著較廣的應用范圍。等位酶作為一種穩(wěn)定的基因組標記，它所揭示的酶蛋白質的多態(tài)性可以看作是對整個基因組的隨機取樣，從而對種群的遺傳學結構做出估計，測量種群的遺傳多樣性以及各種群間的遺傳距離。進行等位酶分析首先要把各種有功能的可溶性酶蛋白質從植物細胞中提取出來，并保證這些酶提取出來以后活性基本不變。通常使用的提取緩沖液（extractingbuffer）有

3、簡單磷酸提取緩沖液、復雜磷酸提取緩沖液、Tris馬來酸提取緩沖液和TrisHCl提取緩沖液四種。多數(shù)食用植物和花粉可以用簡單緩沖液提取，而大多數(shù)野生植物由于含有較多的酚類等有害于酶蛋白質的物質，一般需要用復雜的提取緩沖液。所以，等位酶分析的第一步就是針對具體的實驗材料確定合適的提取緩沖液（詳見王中仁1996）。然后進行電泳分離。現(xiàn)在經常使用的有水平切片淀粉凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、醋酸纖維素膜電泳等等，這一過程相對簡單，要注意的是在

4、整個過程中要防止酶失去活性。電泳結束后應立即進行染色。等位酶染色分為膠染和液染兩種，到底采用哪一種染色方法，主要取決于各自實驗室的條件、染色效果以及染色的成本等等。許多研究都提供了各種不同酶系統(tǒng)染色的詳細配方(Soltisetal.1983Werth1985Pasteuretal.1988Wendel&Weeden1989Werth1990)。含有各種酶蛋白的組織勻漿樣品經過凝膠電泳以后，由于不同酶蛋白的凈電荷以及分子大小和形狀不同而遷

5、移速率不同，各種酶蛋白分散在電泳跑道上。但此時這些酶是看不見的。專性組織化學染色是其成為可見酶譜的一個重要環(huán)節(jié)。通常，一種染色混合液只提供適合于特定酶的特殊反應底物，使得這種酶催化有關聯(lián)的特殊反應，產生可見的染料?；瘜W探測染色、電子傳遞染料染色、酶連鎖染色是三種常見的染色方法。在化學探測染色反應中，凝膠上的酶蛋白與染液中的底物反應，反應產物再和重氮鹽（如固藍RRaba2a1a2b2b2b1圖1等位酶標記的原理與流程（以基因型為ab單體酶