3α-羥類固醇脫氫酶抗體的制備及標記.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、睪丸酮叢毛單胞菌含有降解甾核的關鍵酶3α-羥類固醇脫氫酶(3α-HSD)，通過包含許多酶的氧化甾核的復雜代謝途徑，可以分解類固醇類物質。 本研究采用單克隆抗體技術制備抗3α-HSD單克隆抗體，獲得了高表達抗3α-HSD的單克隆抗體的雜交瘤細胞株。主要方法是：將3α-HSD純化后免疫雌性Balb/c小鼠，取其脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行融合，經克隆和間接ELISA篩選，獲得3株穩(wěn)定分泌抗3α-HSD單克隆抗體的雜交瘤細胞株。經

2、過鑒定：其腹水效價分別為1×106、1×105、1×104。 采用G蛋白親和層析柱對腹水進行純化，將純化后的腹水單抗分別用辣根過氧化物酶(HRP)和異硫氰酸熒光素(FITC)標記，制備酶標抗體和熒光抗體，并對該酶標抗體和熒光抗體進行鑒定。制備所得酶標抗體和熒光抗體具有特異性強、敏感性高的特點。我們應用本研究制備的酶標單克隆抗體建立了雙抗體夾心ELISA方法，對采集的水源樣品進行檢測。結果表明，該單克隆抗體顯示了對類固醇類物質的高

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