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文檔簡介
1、17β-HSD10對于多種底物具有催化作用，現(xiàn)已證實，該酶參與3-羥基輔酶A、異亮氨酸、性激素和神經(jīng)激素的新陳代謝過程。此外，17β-HSD10還參與大腦認知活動，在阿爾茨海默病（AD）患者和AD小鼠模型的腦中都檢測到17β-HSD10的大量表達，預示著該蛋白作為診斷阿爾茨海默病的生物標志物的開發(fā)價值。
本文采用RT-PCR克隆得到小鼠肝臟17β-HSD10基因，構(gòu)建了該基因的原核表達體系pET-15b-17β-HSD10/E
2、.coliBL21(DE3)，IPTG誘導重組蛋白表達并優(yōu)化表達條件;目的蛋白用His-Binding-resin純化柱進行純化，并免疫BALB/c小鼠和新西蘭大耳白兔，免疫血清總IgG采用硫酸銨沉淀法純化，用獲得的高效價鼠源和兔源兩種多克隆抗體，建立17β-HSD10雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測方法(ELISA)。最終表達的蛋白分子量約為29.5kDa，純化后濃度為1.5mg/mL，鼠源和兔源多克隆抗體效價分別為1.25×104和2.5×10
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