17β-羥基類固醇脫氫酶10(17β-HSD10)的表達(dá)及應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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1、17β-HSD10對(duì)于多種底物具有催化作用，現(xiàn)已證實(shí)，該酶參與3-羥基輔酶A、異亮氨酸、性激素和神經(jīng)激素的新陳代謝過程。此外，17β-HSD10還參與大腦認(rèn)知活動(dòng)，在阿爾茨海默?。ˋD）患者和AD小鼠模型的腦中都檢測(cè)到17β-HSD10的大量表達(dá)，預(yù)示著該蛋白作為診斷阿爾茨海默病的生物標(biāo)志物的開發(fā)價(jià)值。
　　本文采用RT-PCR克隆得到小鼠肝臟17β-HSD10基因，構(gòu)建了該基因的原核表達(dá)體系pET-15b-17β-HSD10/E

2、.coliBL21(DE3)，IPTG誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)并優(yōu)化表達(dá)條件;目的蛋白用His-Binding-resin純化柱進(jìn)行純化，并免疫BALB/c小鼠和新西蘭大耳白兔，免疫血清總IgG采用硫酸銨沉淀法純化，用獲得的高效價(jià)鼠源和兔源兩種多克隆抗體，建立17β-HSD10雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法(ELISA)。最終表達(dá)的蛋白分子量約為29.5kDa，純化后濃度為1.5mg/mL，鼠源和兔源多克隆抗體效價(jià)分別為1.25×104和2.5×10

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