癌基因腫瘤抑制基因與生長因子ppt課件

1、1,癌基因、腫瘤抑制基因與生長因子Oncogenes, Tumor suppressor gene and Growth Factors,2,細(xì)胞正常增殖是有目的、受機體生長信號控制的,,,,,,增殖,,,靜止,,分化,,衰老,,凋亡,Apoptosis,Senescence,,,3,腫瘤:,細(xì)胞的非正常增殖!,細(xì)胞非正常增殖是無目的、不受機體生長信號控制的,,4,在基因水平上促使細(xì)胞增殖及凋亡失衡，導(dǎo)致細(xì)胞惡性變的原因有：,①

2、 控制細(xì)胞增殖的原癌基因活化或腫瘤抑制基因失活；② 促細(xì)胞凋亡的基因失活或抑制凋亡的基因功能增強；③ DNA修復(fù)基因失活，使突變在細(xì)胞內(nèi)積累，并且累及到調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及細(xì)胞凋亡的基因。,5,腫瘤細(xì)胞增殖機制,一、癌基因二、抑癌基因 三、DNA修復(fù)基因 四、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的基因五、癌基因、抑癌基因和調(diào)節(jié)凋亡的 基因在腫瘤發(fā)生中的協(xié)同作用,,6,癌基因和腫瘤抑制基因在細(xì)胞增殖中的作用,7,癌基因Oncogenes,第一

3、節(jié),8,基因組內(nèi)正常存在的基因，其編碼產(chǎn)物通常作為正調(diào)控信號，促進細(xì)胞的增殖和生長。癌基因的突變或表達(dá)異常是細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化（癌變）的重要原因。,癌基因(oncogene),9,癌基因最早在可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的病毒中被鑒定。后來的研究發(fā)現(xiàn)，這些基因原本就存在于大部分生物的正?；蚪M中，因而癌基因又被稱為細(xì)胞癌基因（cellular oncogene，c-onc）或原癌基因（proto-oncogenes，pro-onc）。存在于病毒中的被稱為病

4、毒癌基因（virus oncogene，v-onc）。,一、癌基因的基本概念,10,凡能編碼生長因子、生長因子受體、細(xì)胞內(nèi)生長信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子以及與生長有關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子等的基因。細(xì)胞的必需基因。編碼生長因子及其受體、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子、 轉(zhuǎn)錄因子、Cyclin 及CDK等,細(xì)胞癌基因,11,由病毒攜帶并傳播的，可以引起宿主正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因. 病毒癌基因來源于細(xì)胞癌基因。,病毒癌基因,,12,廣泛存在于生物界基因序

5、列高度保守在結(jié)構(gòu)上與病毒癌基因相近正常情況下表達(dá)水平很低表達(dá)產(chǎn)物對細(xì)胞正常生長、繁殖、發(fā)育和分化起著精確的調(diào)控作用?；蚪Y(jié)構(gòu)發(fā)生異?；虮磉_(dá)失控，導(dǎo)致細(xì)胞生長增殖和分化異常,（一）細(xì)胞癌基因,特點:,13,功能上相關(guān)的癌基因家族分類,src家族：產(chǎn)物多具有酪氨酸蛋白激酶活性，能促進增殖信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)。 ras家族：編碼小G 蛋白p21，參與cAMP水平的調(diào)節(jié)。 myc家族：編碼核內(nèi)DNA結(jié)合蛋白，調(diào)節(jié)其他基因轉(zhuǎn)錄的作用。sis

6、家族：編碼的p28，能刺激間葉組織的細(xì)胞分裂繁殖。myb家族：核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子,14,人體內(nèi)細(xì)胞癌基因的分類及功能舉例,15,癌基因最早發(fā)現(xiàn)于逆轉(zhuǎn)錄病毒中。1911年，F(xiàn). Rous醫(yī)生首次提出病毒引起腫瘤，但直到上一世紀(jì)50年代才得到實驗證實，命名為羅氏肉瘤病毒（Rous Sarcoma Virus，RSV）。,（二）病毒癌基因,16,病毒基因組結(jié)構(gòu),17,病毒癌基因v-src來源于宿主細(xì)胞的C-SRC基因,18,19,細(xì)胞癌基因與病毒

7、癌基因的差別,,20,（一）獲得啟動子與增強子,二、癌基因活化的機制,逆轉(zhuǎn)錄病毒感染細(xì)胞后，病毒基因組所攜帶的長末端重復(fù)序列（LTR內(nèi)含較強的啟動子和增強子）插入到細(xì)胞原癌基因附近或內(nèi)部, 啟動下游鄰近基因的轉(zhuǎn)錄和影響附近結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄水平，使原癌基因過度表達(dá)或由不表達(dá)變?yōu)楸磉_(dá)，從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生癌變。,21,（二）染色體易位,在染色體易位的過程中發(fā)生了某些基因的易位和重排，使原來無活性的原癌基因移至強的啟動子或增強子附近而被活化，原癌基

8、因表達(dá)增強，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。,22,（三）基因擴增,原癌基因可通過基因擴增（gene amplification）使基因拷貝數(shù)可升高幾十甚至上千倍不等，發(fā)生擴增的機制目前尚不清楚?；驍U增可致編碼產(chǎn)物過量表達(dá)，細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。,23,（四）點突變,原癌基因在射線或化學(xué)致癌劑作用下，發(fā)生單個堿基的替換——點突變(point mutation), 從而改變了表達(dá)蛋白的氨基酸組成，造成蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變異。,24,癌基因活化的4種機制示意圖,25,

9、出現(xiàn)新的表達(dá)產(chǎn)物 出現(xiàn)過量的正常表達(dá)產(chǎn)物出現(xiàn)異常、截短的表達(dá)產(chǎn)物,癌基因激活的結(jié)果：,26,作用于細(xì)胞膜上的受體系統(tǒng)或直接被傳遞至細(xì)胞內(nèi)，通過蛋白激酶活化轉(zhuǎn)錄因子，引發(fā)一系列基因的轉(zhuǎn)錄激活。,三、原癌基因的產(chǎn)物與功能,sis表達(dá)蛋白P28和PDGF一樣能促進血管的生長。,（一）細(xì)胞外生長因子,例如：,27,（二）跨膜的生長因子受體：,接受細(xì)胞外的生長信號并將其傳入胞內(nèi)。受體的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)區(qū)具有特異的蛋白激酶活性，通過磷酸化作用使其結(jié)構(gòu)發(fā)

10、生改變，增加激酶對底物的活性，促進生長信號在胞內(nèi)的傳遞。,例如,c-src、c-abl有酪氨酸特異的蛋白激酶活性。c-mos和raf所編碼的激酶使絲氨酸和蘇氨酸殘基磷酸化。,28,非受體酪氨酸激酶(src，abl)、絲氨酸/蘇氨酸激酶(raf)，ras蛋白(H-ras，K-ras和N-ras)及磷脂酶(crk產(chǎn)物)。,（三）細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)分子,原癌基因的產(chǎn)物作為胞內(nèi)信息傳遞體系成員，或者通過影響第二信使作用，將接受到的信號由胞內(nèi)傳至核

11、內(nèi)，促進細(xì)胞生長。,例如：,29,（四）核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子,某些癌基因表達(dá)蛋白定位于細(xì)胞核內(nèi)，與靶基因的順式調(diào)控元件相結(jié)合直接調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄活性。,例如：,c-fos是一種即刻早期反應(yīng)基因(immediate early gene，IEG)。作為傳遞信息的第三信使。,30,31,原癌基因BRAF所編碼的蛋白質(zhì)屬于絲/蘇氨酸激酶，是MAPK信號通路的重要組成分子，在調(diào)控細(xì)胞增殖、分化等方面發(fā)揮重要作用。,四、癌基因表達(dá)產(chǎn)物促進腫瘤發(fā)生發(fā)展,約

12、60%的黑素瘤中BRAF發(fā)生突變，其第600位氨基酸從纈氨酸突變?yōu)楣劝彼幔╒600E）最為常見，導(dǎo)致B-Raf的持續(xù)激活。,（一）BRAF,例如：,32,HER2是表皮生長因子受體家族成員，具有蛋白酪氨酸激酶活性，能激活下游信號通路，從而促進細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡。,在30%的乳腺癌中HER2基因發(fā)生擴增或者過度表達(dá)，其表達(dá)水平與治療后復(fù)發(fā)率和不良預(yù)后顯著相關(guān)。,（二）HER2,例如：,33,慢性粒細(xì)胞白血病患者的9號染色體與22號染色

13、體之間發(fā)生易位，從而融合產(chǎn)生了癌基因BCR-ABL，編碼的蛋白質(zhì)Bcr-Abl具有持續(xù)活化的蛋白酪氨酸激酶活性，能促進細(xì)胞增殖，并增加基因組的不穩(wěn)定性。,在95%的慢性粒細(xì)胞白血病患者中都伴隨有BCR-ABL融合基因的產(chǎn)生，在一些急性淋巴白血病患者中也有發(fā)現(xiàn)。,（三）BCR-ABL,例如：,34,腫瘤抑制基因tumor suppressor gene,第二節(jié),35,腫瘤抑制基因(tumor suppressor gene),腫瘤抑制基

14、因的概念,也稱抗癌基因（anticancer gene）或抑癌基因，是調(diào)節(jié)細(xì)胞正常生長和增殖的基因。當(dāng)這些基因不能表達(dá)，或者當(dāng)它們的產(chǎn)物失去活性時，細(xì)胞就會異常生長和增殖，最終導(dǎo)致細(xì)胞癌變。反之，若導(dǎo)入或激活它則可抑制細(xì)胞的惡性表型。,36,早在20世紀(jì)20年代，T. Boveri就提出正常細(xì)胞中存在特異的抑制細(xì)胞增殖的因素，并假定與染色體有關(guān)。20世紀(jì)60年代，H. Harris開創(chuàng)了雜合細(xì)胞的致癌性研究 A.Knudson在研究

15、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（retinoblastoma，Rb）的流行病學(xué)中發(fā)現(xiàn)Rb基因,一、腫瘤抑制基因的發(fā)現(xiàn),37,細(xì)胞雜交試驗,,38,,二、腫瘤抑制基因的功能,常見的某些腫瘤抑制基因及其功能,39,? 原癌基因表達(dá)產(chǎn)物的負(fù)調(diào)控分子? DNA 修復(fù)酶? 細(xì)胞周期抑制分子? 促進細(xì)胞凋亡的分子,抑癌基因表達(dá)產(chǎn)物的功能,,40,,為什么Rb基因缺失后細(xì)胞會出現(xiàn)異常增殖？,41,27個外顯子　26個內(nèi)含子,mRNA　4.7kb,編碼928個

16、氨基酸105kDa 的核內(nèi)蛋白，產(chǎn)物定位于細(xì)胞核，含有病毒蛋白和細(xì)胞蛋白的結(jié)合位點及磷酸化位點,位于染色體13q14,,三、腫瘤抑制基因失活促進腫瘤發(fā)生發(fā)展,（一）視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因（Rb基因）,42,Rb 基因產(chǎn)物的生物學(xué)活性,調(diào)節(jié)細(xì)胞周期：,控制G1和S期交界點,與其磷酸化狀態(tài)有關(guān),gatekeeper of the cell cycle,,43,,G0 G1期,S期,E-2F,,DNA,mRNA,DNA,,44,Rb磷酸化對細(xì)胞

17、周期的影響,,45,Rb 作用,低磷酸化的pRb結(jié)合并滅活E2F，使細(xì)胞不能通過G1-S檢驗點（checkpoint）；高磷酸化的pRb不結(jié)合E2F， E2F可促進S期必需的基因產(chǎn)物如二氫葉酸還原酶，胸苷激酶，DNA聚合酶α等合成，細(xì)胞周期向前推進,,46,,47,Rb 基因異常主要表現(xiàn)為等位基因缺失和基因突變。最初在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中發(fā)現(xiàn)，后來在多種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)該基因的異常。小細(xì)胞肺癌異常為50%，骨肉瘤47%，乳腺癌32%,Rb基因異

18、常與腫瘤,,48,Rb磷酸化與細(xì)胞周期控制,49,,為什么說TP53基因是人類基因組的衛(wèi)士？,50,,,TP53的抑癌作用可能是通過其蛋白與DNA的結(jié)合來實現(xiàn)的。,TP53基因是人類腫瘤有關(guān)基因中突變頻率最高的基因。人類腫瘤有50%以上是由于P53基因缺失造成的。,（二）TP53,51,TP53　基因的結(jié)構(gòu),編碼393氨基酸組成的53kDa蛋白,16-20kb,定位于人類染色體17p13.1，mRNA 2.8kb,11個外顯子,,52

19、,TP53基因產(chǎn)物的生物學(xué)功能,細(xì)胞周期的調(diào)控參與DNA修復(fù)促進細(xì)胞凋亡,,53,P53蛋白,解鏈酶,復(fù)制因子A,,P21蛋白,細(xì)胞停滯于G1期,,細(xì)胞調(diào)亡,DNA損傷,,P53蛋白,P53蛋白,54,55,G1/S檢查點,S/ G2期檢查點,圖4 細(xì)胞周期檢查點,G2/M檢查點,M/G0檢查點,56,P53,圖5 P53促進CDI中的P21cip1表達(dá),57,TP53---基因組的衛(wèi)士,P53蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和DNA修復(fù)基因的

20、表達(dá),紫外線照射或其他DNA損傷引起的細(xì)胞周期阻滯依賴于p53,突變的p53不能阻止DNA損傷細(xì)胞進入S期,,58,p53的結(jié)構(gòu)及其在清除DNA損傷細(xì)胞中的作用,59,P53基因突變不僅失去野生型p53抑制腫瘤增殖的作用，而且突變本身又使該基因具備癌基因功能。突變的P53蛋白與野生型P53蛋白相結(jié)合，形成的這種寡聚蛋白不能結(jié)合DNA，使得一些癌變基因轉(zhuǎn)錄失控導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。,60,（三）PTEN,PTEN基因（phosphatase a

21、nd tensin homolog deleted on chromosome ten，第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因）是繼TP53基因后發(fā)現(xiàn)的另一個與腫瘤發(fā)生關(guān)系密切的腫瘤抑制基因。,61,PTEN通過阻斷PI3K/AKT信號通路抑制細(xì)胞的生長,62,,四、腫瘤抑制基因與疾病,RBAPCVHL,腫瘤抑制基因在細(xì)胞增殖、生長、分化過程中發(fā)揮重要作用，其功能缺失會導(dǎo)致腫瘤等相關(guān)疾病的發(fā)生，研究腫瘤抑制基因發(fā)揮作用的相關(guān)分

22、子機制能夠為分子靶向治療策略提供理論依據(jù)，也為攻克癌癥等頑疾帶來曙光。,63,,五、癌基因與腫瘤抑制基因在腫瘤發(fā)生中的作用特點,在基因水平上，或通過外界致癌因素，或由于細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的惡化，突變基因數(shù)目增多，基因組變異逐步擴大；在細(xì)胞水平上則要經(jīng)過永生化、分化逆轉(zhuǎn)、轉(zhuǎn)化等多個階段，細(xì)胞周期失控細(xì)胞的生長特性逐步得到強化。結(jié)果組織從增生、異型變、良性腫瘤、原位癌發(fā)展到浸潤癌和轉(zhuǎn)移癌。,（一）細(xì)胞癌變的多基因協(xié)同,64,從基因角度認(rèn)識結(jié)腸癌

23、的發(fā)生和發(fā)展,65,（二）細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的分子調(diào)控是腫瘤進展的關(guān)鍵,癌基因和腫瘤抑制基因與細(xì)胞周期細(xì)胞周期調(diào)控體現(xiàn)在細(xì)胞周期驅(qū)動和細(xì)胞周期監(jiān)控兩個方面，后者的失控與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系最為密切。細(xì)胞周期監(jiān)測機制由DNA損傷感應(yīng)機制、細(xì)胞生長停滯機制、DNA修復(fù)機制和細(xì)胞命運決定機制等構(gòu)成。 癌基因、腫瘤抑制基因與細(xì)胞凋亡細(xì)胞除了生長、增生和分化等現(xiàn)象之外，還存在細(xì)胞死亡現(xiàn)象，即程序性細(xì)胞死亡或凋亡。有些腫瘤抑制基因的過量表達(dá)可

24、誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，而與細(xì)胞生存相關(guān)的癌基因的激活則可抑制凋亡，細(xì)胞凋亡異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展的密切相關(guān)。,66,促進正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化的因素,67,生長因子Growth factors,第三節(jié),68,生長因子(growth factor),一類由細(xì)胞分泌的、類似于激素的信號分子，多數(shù)為肽類（含蛋白類）物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長與分化的作用。,69,,內(nèi)分泌 (endocrine)旁分泌 (paracrine)自分泌 (autocri

25、ne),作用模式 ：,70,一、生長因子的分類和功能,（一）生長因子的分類,71,（二）生長因子的功能,生長因子的生物學(xué)效應(yīng)主要表現(xiàn)在促進細(xì)胞生長、分化、促進個體發(fā)育等方面。但是有些生長因子具有雙重調(diào)節(jié)作用或負(fù)調(diào)節(jié)作用。 同一生長因子對不同細(xì)胞的作用有所不同 一種細(xì)胞也可受不同生長因子調(diào)節(jié) 具有負(fù)調(diào)節(jié)作用的生長因子比較少，人們通常把這種負(fù)調(diào)節(jié)因子（negative growth factor）稱為細(xì)胞生長抑制因子。,72,產(chǎn)生相應(yīng)

26、第二信使,胞內(nèi)相關(guān)蛋白質(zhì)被磷酸化,與膜受體結(jié)合,酪氨酸激酶活化,蛋白激酶活化,核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子活化,基因轉(zhuǎn)錄,與胞內(nèi)受體結(jié)合,,,,,,,,生長因子 - 受體復(fù)合物，活化相關(guān)基因,,,,二、生長因子作用機制,73,74,腫瘤的發(fā)生除了與癌基因的異?；罨约澳[瘤抑制基因的異常失活密切相關(guān)外，其與生長因子及其受體的高度活化亦緊密相關(guān)，如EGF、VEGF、TNF及IGF、PDGF等的過度表達(dá)能導(dǎo)致相應(yīng)的腫瘤發(fā)生。,三、生長因子與疾病,（一）生長因