力生長(zhǎng)因子基因的克隆、表達(dá)及產(chǎn)物的純化.pdf

1、人的力生長(zhǎng)因子（human mechano growth factor，hMGF）是一個(gè)由110個(gè)氨基酸組成的堿性多肽。hMGF具有激活衛(wèi)星細(xì)胞，促使細(xì)胞增殖，同時(shí)抑制其分化的作用。hMGF在維持局部組織質(zhì)量和組織修復(fù)過(guò)程中有顯著效果，具有誘導(dǎo)局部蛋白質(zhì)合成和防止細(xì)胞凋亡的高潛能。 在hMGF的研究過(guò)程中，用人體材料（血或組織等）作為制備來(lái)源是有限的和不可取的，且血清中的hMGF含量非常低。為了獲得大量的hMGF產(chǎn)品，基因工程是

2、可取的途徑。通過(guò)人工合成hMGF全基因序列, 以T載體過(guò)渡將其克隆至pMAL-p2x、pET-32a(+)及pET-3c載體中，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pMAL-p2x-hMGF1、pET-32a(+)-hMGF1及pET-3c-hMGF2，經(jīng)測(cè)序證明正確后，分別轉(zhuǎn)化入BL21及BL21（DE3）plyss-star菌中進(jìn)行表達(dá)研究。經(jīng)過(guò)IPTG（異丙基硫代-β-半乳糖苷）誘導(dǎo)表達(dá)后，通過(guò)SDS-PAGE分析表明融合表達(dá)載體pMAL-p2x的表

3、達(dá)效果較好，能表達(dá)出分子量約為37KD的融合蛋白，表達(dá)量約占菌體蛋白總量的25％。發(fā)酵后，菌體采用超聲破菌，融合蛋白以包涵體形式存在。 通過(guò)不同濃度的尿素洗滌溶解包涵體,以Ni-NTA樹(shù)脂對(duì)目的蛋白進(jìn)行分離純化，分步透析法復(fù)性目的蛋白以后用EK酶酶切，得到天然結(jié)構(gòu)的hMGF蛋白。經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測(cè)，純度達(dá)到90％以上。 上述結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)已經(jīng)成功的得到了pMAL-p2x-hMGF1融合重組表達(dá)質(zhì)粒，并能在BL21菌中以