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1、雜合性缺失是抑癌基因的失活中最早出現(xiàn)的一種遺傳學(xué)改變,也是與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切關(guān)聯(lián)的一種遺傳學(xué)改變。雜合性缺失與抑癌基因之間的關(guān)聯(lián)使得雜合性缺失的研究已被廣泛應(yīng)用于尋找抑癌基因。
SPATA12基因是一個(gè)與人類精子發(fā)生相關(guān)的新基因,定位于染色體雜合性缺失區(qū)域3p14,提示其可能與腫瘤的發(fā)生相關(guān)。過去的研究顯示,SPATA12基因作用于Hela細(xì)胞時(shí),G0-G1期細(xì)胞數(shù)增加,而S期和M期細(xì)胞明顯減少,提示SPATA12的表達(dá)
2、能延緩腫瘤細(xì)胞由G0/G1期進(jìn)入S期,可能參與了抑制細(xì)胞的增殖?;谝陨涎芯勘尘昂凸ぷ骰A(chǔ),我們認(rèn)為SPATA12可能具有抑癌基因的某些特性。
在本研究中我們采用組織芯片原位雜交、MTT、平板集落形成、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)以及RT-PCR技術(shù)等一系列細(xì)胞與分子生物學(xué)手段來了解SPATA12基因與腫瘤發(fā)生之間的相關(guān)性,及其對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移的影響以及可能機(jī)制。
我們先采用高通量的組織芯片原位雜交實(shí)驗(yàn)對(duì)SPATA
3、12基因在睪丸癌以及其他多器官腫瘤中的表達(dá)缺失頻率進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示:(1)SPATA12在不同類型睪丸腫瘤中的表達(dá)完全缺失,推測(cè)其可能是一個(gè)與男性生殖細(xì)胞腫瘤相關(guān)的候選抑癌基因。(2)SPATA12基因在卵巢、乳腺、肝臟、大腦等器官的腫瘤組織中表達(dá)完全缺失,而在黑色素瘤、胃癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、甲狀腺與前列腺癌組織中存在部分缺失。推測(cè)SPATA12基因在不同的腫瘤組織中可能存在的突變導(dǎo)致了表達(dá)水平的變化。(3)在肺腫瘤組織中,SPAT
4、A12在惡性程度最高的小細(xì)胞癌中完全不表達(dá),在非小細(xì)胞癌中存在部分表達(dá)丟失。在不同種類的非小細(xì)胞癌中,又以腺癌的丟失頻率最高,其次為鱗癌、類癌和大細(xì)胞癌。說明SPATA12基因在肺腫瘤組織中的缺失頻率與不同病理類型相關(guān)。
采用MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞平板集落形成實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)考查了SPATA12基因?qū)δ[瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和遷移等生物學(xué)行為方面的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:SPATA12可明顯地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖能力、集落形成能力和細(xì)胞遷
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