咳喘康對(duì)博萊霉素a5致肺纖維化大鼠肺組織中tgf-β1及其受體mrna表達(dá)的影響_徐艷玲

1、表1各組大鼠的定位航行試驗(yàn)總時(shí)間總路程比較組別n總時(shí)間(S)總路程(cm)獨(dú)活組924.9411.821587.787.3西藥組959.6419.22v3727.320.8vv模型組957.2230.50v3273.514.5vv假手術(shù)組935.4724.95v1821.111.3vv注:各實(shí)驗(yàn)組與獨(dú)活組比較vP0105各實(shí)驗(yàn)組與獨(dú)活組比較vvP0105。性學(xué)習(xí)包括各類(lèi)迷宮。本實(shí)驗(yàn)采用的Mris的水迷宮行為學(xué)是一種空間記憶的模型與大鼠的

2、學(xué)習(xí)記憶功能有關(guān)較其他方法有其明顯的優(yōu)越性結(jié)合特定的迷宮及攝像系統(tǒng)、正確的訓(xùn)練程序及專(zhuān)用的統(tǒng)計(jì)軟件使學(xué)習(xí)記憶實(shí)驗(yàn)研究的指標(biāo)觀(guān)測(cè)系統(tǒng)而全面具有操作簡(jiǎn)便、數(shù)據(jù)誤差小的特點(diǎn)近年來(lái)常利用這種方法來(lái)研究大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。觀(guān)察的指標(biāo)主要是計(jì)算動(dòng)物找到平臺(tái)所需要的時(shí)間以及動(dòng)物游泳的路程。這種水迷宮方法已成為神經(jīng)科學(xué)研究前沿公認(rèn)的動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶行為學(xué)檢測(cè)先進(jìn)方法。本實(shí)驗(yàn)采用直接向大鼠海馬區(qū)注射凝聚態(tài)AB140方法制作AD的動(dòng)物模型可較好地模擬老年性癡呆

3、行為學(xué)表現(xiàn)可作為AD模型之一[5]。中醫(yī)認(rèn)為AD的病位在腦與心肝脾腎功能失調(diào)密切相關(guān)。其性質(zhì)是本虛標(biāo)實(shí)本虛主要為腎精虧損和氣血不足標(biāo)實(shí)主要表現(xiàn)為淤血阻絡(luò)、痰濕阻竅。臟腑功能失調(diào)是AD發(fā)病的重要病理基礎(chǔ)瘀血阻絡(luò)、痰收稿日期:20080708基金項(xiàng)目:遼寧省教育廳科研課題(05L241)作者簡(jiǎn)介:徐艷玲(1957)女遼寧綏中人主任醫(yī)師、教授碩士生導(dǎo)師研究方向:中西醫(yī)結(jié)合治療呼吸系統(tǒng)疾病。濕阻竅是AD的重要因素。獨(dú)活味辛、苦性微溫歸腎膀胱經(jīng)。

4、現(xiàn)代中藥學(xué)多用其祛風(fēng)除濕通痹止痛的功效以治風(fēng)寒濕痹腰膝疼痛少陰伏風(fēng)頭痛。獨(dú)活為常用中藥始載于5神農(nóng)本草經(jīng)6列為上品主風(fēng)寒所擊金瘡止痛奔豚癇疰女子疝瘕久服輕身耐老0。縱觀(guān)歷代本草可以看出獨(dú)活是一味行氣活血、溫養(yǎng)營(yíng)衛(wèi)、入陰升陽(yáng)、通補(bǔ)兼得的抗衰老之良藥。其延緩衰老的機(jī)制主要是行氣活血、祛瘀除濕?，F(xiàn)代藥理研究表明獨(dú)活具有抑制血小板聚集、抗血栓、拮抗鈣通道受體、增強(qiáng)免疫功能、抗關(guān)節(jié)炎、鎮(zhèn)痛等作用[6]。故獨(dú)活可適用于防治老年性癡呆。本實(shí)驗(yàn)采用Mr

5、is水迷宮檢測(cè)獨(dú)活對(duì)大鼠定位航行學(xué)習(xí)記憶能力的改善作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明模型組大鼠在檢測(cè)中的所用時(shí)間延長(zhǎng)、游泳距離明顯增加說(shuō)明模型組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力受到嚴(yán)重?fù)p傷。獨(dú)活組大鼠在試驗(yàn)中的上述兩項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)都明顯優(yōu)于模型組表明獨(dú)活對(duì)AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有明顯改善作用。參考文獻(xiàn)[1]宋葆華.地黃引子對(duì)老年癡呆大鼠認(rèn)知能力的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志200532(6):616.[2]丁正明.老年癡呆動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J].浙江中西醫(yī)雜志20001

6、0(10):638640.[3]胡海燕.清心開(kāi)竅方對(duì)老年癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響研究[J].浙江中西醫(yī)志2008243(2):104106.[4]楊文明.智腦膠囊對(duì)血管性癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶及腦組織鈣含量的影響[J].中國(guó)實(shí)用方劑學(xué)雜志2007(12):3436.[5]謝寧.地黃引子對(duì)AD模型大鼠定位航行學(xué)習(xí)記憶的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)200533(4):2829.[6]裴媛.獨(dú)活及其醇提物對(duì)自然衰老小鼠腦細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究[

7、J].遼寧中醫(yī)雜志20045(8):989990.咳喘康對(duì)博萊霉素A5致肺纖維化大鼠肺組織中TGFB1及其受體mRNA表達(dá)的影響徐艷玲曲妮妮馬麗佳趙克明鄧?yán)驈垪钔觖惸认男捞镪愪h鄭洪亮(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院遼寧沈陽(yáng)110032)摘要:目的:研究咳喘康對(duì)博萊霉素A5致肺纖維化大鼠肺組織中TGFB1及其受體mRNA表達(dá)的影響。方法:將60只健康SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、中藥咳喘康組和激素組。除正常組外其余3組大鼠經(jīng)氣管注入博萊霉素A5

8、復(fù)制肺纖維化大鼠模型各組于造模后第1天分組予以給藥于給藥7、14、28天分批處死各組大鼠每次每組5只。利用ELISA法檢測(cè)肺組織中TGFB1的含量、RTPCR法檢測(cè)肺組織中TGFB1mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果:模型組在不同時(shí)段TGFB1含量及TGFB1mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組均明顯增高具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0101)?？却到M大鼠肺組織勻漿中TGFB1含量、TGFB1mRNA的表達(dá)水平與模型組對(duì)照降低且有隨給藥天數(shù)增加而降低的趨勢(shì)具有統(tǒng)

9、計(jì)學(xué)意義(P0101)。結(jié)論:中藥復(fù)方咳喘康具有顯著抑制博萊霉素A5致大鼠肺纖維化的作用通過(guò)降低TGFB1的含量及抑制TGFB1mRNA的表達(dá)是其可能的機(jī)制之一。關(guān)鍵詞:肺纖維化大鼠TGFB1TGFB1mRNA咳喘康中圖分類(lèi)號(hào):R28515文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B文章編號(hào):10001719(2009)01014503肺間質(zhì)纖維化是呼吸系統(tǒng)疾病中一組病因各異、表現(xiàn)相似的疾病譜其病理改變以大量的成纖維細(xì)胞聚集、細(xì)胞外基質(zhì)沉積并伴有炎癥和損傷所致組織結(jié)

10、構(gòu)破壞為特征[1]。中醫(yī)對(duì)本病的病證歸屬于肺痿、肺痹范疇。肺腎氣陰兩虛血脈瘀阻貫穿疾病的始終是公認(rèn)的病機(jī)[2]。本實(shí)驗(yàn)采用ELISA法及RTPCR法研究咳喘康對(duì)博萊霉素A5致肺纖維化大鼠肺組織中TGFB1及其受體mRNA表達(dá)的影響從而為肺纖維化的中醫(yī)治療提供理論依據(jù)。1材料與方法111動(dòng)物成年雄性SD大鼠60只體重200~250g由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供合格證號(hào):SCXK(遼)20030013。#145#遼寧中醫(yī)雜志2009年第3

11、6卷第1期表1肺組織TGFB1含量(pgmL?xs)組別n7天14天28天正常組5155.93515.469162.43114.649164.85510.660模型組5222.40424.240244.54036.925273.85819.978中藥組5215.25228.607204.78020.907v170.98212.477vv激素組5185.60817.839v172.41412.632vv172.64616.332vv注:與

12、正常組比較:P0105P0101與模型組比較:vP0105vvP0101。圖1肺組織TGFB1含量(pgmL)212肺組織中TGFB1mRNA表達(dá)模型組大鼠肺組織TGFB1mRNA表達(dá)在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)上均顯著高于正常組有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0101)。第7d時(shí)咳喘康組有降低但與模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義而激素組降低與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0105)。第14d咳喘康組降低與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0105)而激素組顯著降低與模型組比較有顯著

13、性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0101)。第28d咳喘康組和激素組均顯著降低與模型組比較有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0101)而且兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(見(jiàn)表2)。表2TGFB1mRNA表達(dá)(?xs)組別n7天14天28天正常組50.92620.01070.92760.38660.92260.0282模型組50.97820.01901.01850.22211.00560.0299中藥組50.97370.01080.96980.0137v0.92810.0

14、129vv激素組50.95720.0256v0.93580.0128vv0.93230.0146vv注:與正常組比較:P0105P0101與模型組比較:vP0105vvP0101。1、DNAMARKER(自上而下依次為2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp)2、正常組3、模型組4、中藥咳喘康組5、激素組圖2TGFB1mRNA在肺組織中的表達(dá)電泳圖3討論肺間質(zhì)纖維化的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明傳統(tǒng)觀(guān)點(diǎn)認(rèn)為

15、各種原因引起不同程度的肺泡炎癥在炎癥損傷和修復(fù)過(guò)程中導(dǎo)致肺纖維化的形成治療方法強(qiáng)調(diào)抗炎治療但臨床療效不理想[4]。中醫(yī)學(xué)中無(wú)肺纖維化的病名依據(jù)臨床表現(xiàn)該病可歸屬于肺痿0、肺痹0等范疇。中藥辨證治療本病在臨床上已顯示良好優(yōu)勢(shì)。中藥復(fù)方咳喘康是依據(jù)本病病機(jī)而確立的具有益氣養(yǎng)陰活血通絡(luò)作用的復(fù)方制劑用藥精練、組方嚴(yán)謹(jǐn)由黨參15g麥冬15g茯苓15g川芎15g赤芍15g五味子15g生地20g等16味中藥組成。方中:黨參、茯苓補(bǔ)中益氣、健脾益肺五

16、味子酸甘補(bǔ)益肺腎斂氣生津麥冬、生地養(yǎng)陰潤(rùn)肺川芎、赤芍活血散瘀全方共奏益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)之功。TGFB是迄今為止發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞外基質(zhì)沉積最強(qiáng)的促進(jìn)劑不僅能刺激成纖維細(xì)胞增殖及分泌膠原還能抑制膠原的降解在肺纖維化發(fā)展中起關(guān)鍵作用[5]。因此通過(guò)降低TGFB1、抑制TGFB1mRNA的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)肺間質(zhì)纖維化的治療成為了醫(yī)學(xué)界關(guān)注的熱點(diǎn)。模型組第7、14、28d時(shí)大鼠肺組織TGFB1的含量明顯高于正常組、有逐漸上升的趨勢(shì)大鼠肺組織TGFB1mRN

17、A的表達(dá)水平亦明顯高于正常組均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0101)說(shuō)明TGFB1參與了肺纖維化的整個(gè)過(guò)程。中藥組大鼠肺組織TGFB1的含量及TGFB1mRNA的表達(dá)有著下降趨勢(shì)在造模后7d與模型組比較有所降低但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義14d與模型組比較有顯著差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P010528d與模型組比較差異更加明顯具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0101。提示中藥咳喘康可能通過(guò)降低肺纖維化大鼠肺組織中TGFB1的含量、及抑制TGFB1mRNA的表達(dá)從而抑制了TGFB

18、1對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)沉積的促進(jìn)作用。激素組大鼠肺組織TGFB1的含量、TGFB1mRNA表達(dá)亦有著下降趨勢(shì)但造模后14d起TGFB1的含量的下降趨勢(shì)不顯。激素組造模后7d大鼠肺組織TGFB1的含量、TGFB1mRNA表達(dá)低于同期中藥組可能原因是中藥咳喘康在早期抗炎作用較激素氫化可的松弱而造模后28d中藥組的大鼠肺組織TGFB1的含量、TGFB1mRNA表達(dá)要低于同期激素組說(shuō)明中藥咳喘康在后期可通過(guò)降低TGFB1含量、抑制TGFB1mRNA表達(dá)

19、從而實(shí)現(xiàn)抑制細(xì)胞外基質(zhì)沉積的作用但尚需一段起效時(shí)間。綜上所述本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明中藥咳喘康可有效的抑制肺纖維化而通過(guò)降低TGFB1含量、抑制TGFB1mRNA的高表達(dá)起到拮抗肺纖維化的作用可能是其機(jī)制之一本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦提示在肺纖維化的臨床治療中通過(guò)從中醫(yī)的病因病機(jī)出發(fā)對(duì)證辨證治療仍可達(dá)到降低TGFB1的含量、抑制TGFB1mRNA的表達(dá)從而阻止肺泡炎及影響肺纖維化進(jìn)程而其具體全面的作用機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究探討。參考文獻(xiàn)[1]李才張一寧?？∑娴?/p>

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