即墨野生大豆(glycinesojasieb.etzucc)的營養(yǎng)評價及其胰蛋白酶抑制劑的研究

1、摘 要 i 即墨野生大豆(Glycine soja Sieb.et Zucc)的營養(yǎng)評價及其 胰蛋白酶抑制劑的研究 摘 要 我國是世界上野生大豆分布最多的國家。 野生種擁有栽培種所缺乏的具有潛在應(yīng)用價值的豐富變異， 是作物改良的重要基因來源。 野生大豆種子的蛋白質(zhì)含量高于栽培大豆， 野生大豆具有較強(qiáng)的抗逆性和適應(yīng)能力可能與胰蛋白酶抑制劑（Trypsin inhibitor, TI）在野生大豆中的表達(dá)量高于栽培大豆有關(guān)。鑒于

2、野生大豆胰蛋白酶抑制劑 （Wild soybean trypsin inhibitor, WSTI） 的高表達(dá)及良好的生物學(xué)活性， 認(rèn)為有必要對其進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 通過開展對即墨野生大豆資源的研究，本論文可為合理地保護(hù)和利用野生大豆這種生物資源提供一定的理論依據(jù)和數(shù)據(jù)資料。 本文首先對產(chǎn)自即墨的野生大豆進(jìn)行了營養(yǎng)價值評價。 通過凝膠過濾層析和親和層析，借助建立的熒光分光光度法檢測胰蛋白酶抑制劑活性，分離得到WSTI， 并對其結(jié)構(gòu)及性質(zhì)進(jìn)

3、行了研究。提取野生大豆總 RNA 后，反轉(zhuǎn)錄后經(jīng)巢式 PCR 擴(kuò)增出 WSTI 目的基因測序并做生物信息學(xué)分析。主要結(jié)果如下： （1） 以市售栽培大豆為對照， 對即墨野生大豆的主要營養(yǎng)成分進(jìn)行對比分析。結(jié)果表明：即墨野生大豆的蛋白質(zhì)含量為 40.74%，脂肪含量為 16.91%，總糖含量為 11.26%，與栽培大豆無顯著差異；野生大豆含有較多的鐵、鈣元素，但鋅、鎂元素含量較低。 野生大豆脂肪酸種類比栽培大豆少 4 種， 但亞油酸和亞麻酸

4、含量遠(yuǎn)高于栽培大豆；野生大豆氨基酸總量高于栽培大豆，其中谷氨酸含量最高，第一限制氨基酸為含硫氨基酸；必需氨基酸指數(shù)(EAAI)、生物價(BV)、營養(yǎng)指數(shù)(NI)和氨基酸比值系數(shù)(SRCAA)分別比栽培大豆高出 5.41%、5.9%、1.02%和3.71%，說明即墨野生大豆?fàn)I養(yǎng)成分全面且均衡，可作為優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)原料進(jìn)行利用。 （2）對熒光分光光度法測定大豆胰蛋白酶抑制劑的條件進(jìn)行優(yōu)化。通過建立 AMC 標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到抑制劑活力計(jì)算公式：U=

5、（F-300.4）/1.19。該條件下測得的胰蛋白酶抑制劑濃度在 0.1 μg/mL~0.7 μg/mL 范圍內(nèi)，與反應(yīng)速度存在一定的線性關(guān)系， 檢出限約為 8.30 ng/mL，適用于后續(xù)純化過程中胰蛋白酶抑制劑摘 要 iii 氨基和 47 個極性氨基酸。氨基酸序列中含有 BBI 家族的保守序列，其中 62 位的蘇氨酸和 63 位的賴氨酸構(gòu)成其蛋白酶結(jié)合位點(diǎn)， Cys60、 Thr61、 Lys62、 Cys68、Cys87