家蠶小熱休克蛋白22.6基因的研究

1、浙江理工大學碩士學位論文家蠶小熱休克蛋白22.6基因的研究姓名：王威申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：盛清;張耀洲20090601浙江理工大學碩士學位論文A b s t r a c ts H S P s i s a s t r u c t u r a l l yd i v e r g e n tg r o u p ，i n d u c i n g t os y n t h e s i z eo r i n c r e

2、 a s ec o n t e n tw h e n c e l lo r b i o s y s t e m i s s t r e s s e db yv a r i e t yc o n d i t i o n ．T h i s k i n do f p r o t e i n h a sb e e ns t u d i e dl e s s t h a n o t h e r s p r e s e n t l y ．Ag r

3、e a to fs t u d ys h o w st h a t s H S P sp a r t i c i p a t ec o m p l e x a n d i m p o r t a n t p r o s e s s e s o f b i o l o g y n om a t t e r w h e n t h e o r g a n i s mi si nn o r m a lc o n d i t i o n o r

4、 b e i n gs t r e s s e d ．s H S P s i se n c o d e d b yt h e g e n e c o n t a i m n g n oi n t r o nw h i c hi st h es a m e a so t h e rH S P s ．A c o n s e r v a t i v er e g i o n o f 8 0 “ - - 10 0r e s i d u e sl

5、 o c a t e di nt h eC - t e r m i n a lr e g i o n o f t h em o l e c u l e ，c a l l e dt h e ‘‘Q - c r y s t a l l i nd o m a i n ．I t sm o l e c u l a rn l a s si s s m a l l ，謝t 1 1f o r m a t i n gl a r g eo l i g o

6、m e r s ．A n di tc a nb ei n d u c e db ys t r e s s c o n d i t i o n s ．s H S P sC a na l s om a i t a i nt h es t a b i l i t yo fc e l lp r o t e i na sb e i n gm o l e c u l a rc h a p e r o n e s ．s H S P s ’S m a

7、i n f u n c t i o n s a r ea sf o l l o w s ：( 1 ) m a i n t a i n i n g t h e s t a b i l i t y o f c e l lp r o t e i n ；( 2 )p a r t i c i p a t i n gt or e g u l a t et h eg r o w t ha n dd i f f e r e n t i a t i o

8、no fc e l l ；( 3 ) a c t i n gf u n c t i o n si n s i d eo f c e l ln u c l e u s ；( 4 ) t a k i n go ni m m u n o l o g i c a lf u n c t i o n ；( 5 ) a t t e n d i n gt op r o t e c tc e l lm e m b r a n e ；( 6 ) s t a

9、 b i l i z i n g t h ef r a m e w o r k o f c e l l ．W e a n a l y z e dt h eb i o —i n f o r m a t i o no f a e D N A s e q u e n c es e l e c t e df r o ms i l k w o r mp u p ae D N A l i b r a r y c o n s t r u c t e

10、db yt h i s l a b o r a t o r ya n df o u n d t h a tc o m p l e t ee D N As e q u e n c eo f B m H S P 2 2 ．6 g e n ec o n t a i n e da n O R F o f 6 0 0 b p e n c o d i n ga p o l y p e p t i d e o f1 9 9a m i n oa c i

11、 d s w i t ha p r e d i c t e dm o l e c u l a rm a s so f 2 2 ．6k Da n da t h e o r e t i c a lp Io f9 ．5 5 ．B yc o n t r a s t i n gw i t hB l a s ta n d a n a l y s i so f c o n s e r v a t i v ed o m a i n , i tb e l

12、 o n g e dt oah e a t s h o c kp r o t e i n i n B o m b y xm o r i ，a n dw e c a l l e d i t B m H S P 2 2 ．6 ．T h eO R F o fB m H S P 2 2 ．6 g e n e W a s a m p l i f i e db y P C R a n di n s e r t e di n t ot h ep E

13、T 2 8 a ( + ) e x p r e s s i o nv e c t o rb e t w e e nt h es i t e c l e a v e db yB a m H I a n dX h o I ．T r a n s f o r m a t i o no fE ．c o l iB L 2 1 ( D E 3 ) c e l l sf o l l o w e dt h e c o n s t r u c t i o

14、no fp E T 2 8 a ( + ) 一B m H S P 2 2 ．6 ．I P T Gw i t hf m a l c o n c e n t r a t i o n o f l m M w a s a d d e d t o 血e c u l t u r e m e d i u mt o i n d u c e t h ee x p r e s s i o no f r e c o m b i n a n tp r o t

15、e i n ．．A n a l y s i so fS D S —P A G E s h o w e dt h a ta s p e c i f i cp r o t e i nb a n dw a sa t a b o u t 2 5 k D ，a c c o r d i n gw i t ht h ea n t i c i p a t e dd a t a ( f u s i o np a r l n e r3 ．5 6k D ，B

16、 m H S P 2 2 ．62 2 ．6 k O ) ．T h er e s u l to f u l t r a s o n i cd e g r a d a t i o no nb a c t e r i aa l s od i s p l a y e d t h a t i t i s as o l u b l ep r o t e i n ．T h es u p e m a t a n tW a so b t a i n e