mba論文膨脹素工程菌的構(gòu)建及表達(dá)條件的優(yōu)化pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文膨脹素工程菌的構(gòu)建及表達(dá)條件的優(yōu)化姓名：黃莎莎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物學(xué)；植物學(xué)指導(dǎo)教師：胡寶忠2012-06-02A b s 仃a c t ! 詈! 曼! 曼皇暑苧蘭曼! ! 曼皇皇曼! ! 曼曼墨蔓! ! ! 曼寰黑曼曼曼! 皇曼寰墨暑! ! ! ! 曼寰葛詈皇! 曼篡鼉巴曼! ! 曼曼曼墨曼! ! 皇! 曼曼!C o n s t r u c t i o n o f E x p a n s i n E n

2、 g i n e e r i n g S t r a i na n d O p t i m i z a t i o n o f I t sE x p r e s i o n C o n d i t i o n sA b s t r a c tC e l l u l o s ew a st h e m o s t a b u n d a n t a n dt h e m o s tw i d e l y o r g a n i c s o

3、 ne a r t h ．I t w a sa l s o ar e g e n e r a t i v e m a t e r i a l ，i t C a nb e d e g r a d a t e dt o g l u c o s e ，t h i sw a st h ei m p o r t a n t l i n k i nn a t u r e ．B u tb e c a u s eo fh i g l l c r y s

4、 t a l l i z a t i o ns t r u c t u r e o fc e l l u l o s ea n di t w a ss u r r o u n d e db yl i g n i n ，d i r e c t l yi n f l u e n c e t h ep h y s i c o ．c h e m i c a l p r o p e r t y o fc e l l u l o s e ，S O

5、t h a t i t w a sd i f f i c u l t t o h y d r o l y s e i n t og l u c o s e ．E x p a n s i nC a ns o f t e n a n de x p a n dc e l lw a l l ．T h r o u g hm a n yy e a r s r e s e a c h ，s c i e n t i s t sf o u n dt h

6、a t e x p a n s i nC a n ’t d i r e c t l y h y d r o l y s e c e l l u l o s e g l u c o s i d i c b o n d ，b u t i t h a v e s y n e r g i s mw h e nc e l l u l a s e h y d r o l y z ec e l l u l o s e ，i t c a nb r e

7、a k h y d r o g e nb o n db e t w e e nc e l l u l o s em o l e c u l e s ，t h i sc a nd e s t r o yc e l l u l o s e s t r u c t u r ee f f e c t i v e l y , r a i s eh y d r o g e n e f f i c i e n c yo fc e l l u l a

8、s e ．I n t h i ss t u d y , c u c u m b e rD 0 4 6 2a st h eg e n ed o n a t o r ，e x t r a c tt o t a lR N A ，c l o n eC s - E X P A 1a n dC s - E X P A 2 g e n e ，t h e nc o n s t r u c tP i c h i ap a s t o r 婦c o m p

9、 o s i t i o ne x p l ’e s s i o n v e c t o r s p G A P H QM - E X P A 1 a n dp G A P H QM - E X P A 2 ．t r a n s f o r m e x p r e s s i o n v e c t o r si n t oP i c h i a p a s t o r & t o o b t a i ne n g i n e

10、e r i n g s t r a i n s ，i n d u c te x p r e s s i o no fe x p a n s i n ．T h e n o p t i m i z a t i o n c o n d i t i o n o f ‘e x p a n s i n ’S a c t i v i t y d e t e c t i o n a n d e n g i n e e r i n gs t r a i

11、n s ’e x p r e s s i o n ，r a i s es y n e r g i s mh y d r o g e n e f f i c i e n c yo f e x p a n s i n a n d c e l l u l a s e t oc e l l u l o s e ．T h e m a i n r e s u l t sw e r e a sf 0 1 1 0 w e d ：1 ．C l o n e

12、C s - E X P A 1g e n ea n d D ．E X P A 2f r o mc u c u m b e r D 0 4 6 2 b y R T - P C R ，t h e s e q u e n c ew a si d e n t i c a l w i t hs e q u e n c e i n G e n e B 卸a k ．2 ．C o n s t r u c tc o m p o s i t i o ne

13、x p r —e s s i o nv e c t o r sp G A P H a M —E X P A la n d p G A P H a M - E X P A 2 ．3 ．T r a n s f o r m e x p r e s s i o n v e c t o r s p G A P H a M - E X P A l a n d p G A P H a M - E X P A 2 i n t o P i c h i a

14、p a s t o r i sb y e l e c t r i c s h o c k ．T h r o u g hi d e n t i f i c a t i o n o fc o l o n yP C R a n dg e n o m eP C R i n d i c a t e dt h a te x o g e n o u s g e n eh a d b e e n i n t e g r a t e dt ot h e

15、c h r o m o s o m eo f P i c h i a p a s t o r i s ．4 ．T h e c o r r e c tt r a n s f o r m a n te x p r e s s p r o t e i nb yr o c k i n gb e dc u l t i v a t i o n ，T h r o u g hd e t e c t i o n o fS D S ．P A G E g e

16、 l e l e c t r o p h o r e s i sf o u n d t h ei n t e r e s tp r o t e i na tt h e2 9 k D ．5 ．T h r o u g hc o m p a r i s o no fS y n e r g i s mb e t w e e nd e f f e r e n te x p a n s i na n dc e l l u l a s e ，g e

17、t t i n g t h es y n e r g i s t i ca c t i v i t yo fE X P A lp r o t e i na n d c e l l u l a s ew a s 17 ．7 ％．t h e s y n e r g i s t i ca c t i v i t yo fE X P A 2p r o t e i na n dc e l l u l a s ew a s5 9 ．8 ％．t h

18、e s y n e r g i s t i ca c t i v i t y o fE X P A lp r o t e i n 、E X P A 2p r o t e i na n dc e l l u l a s ew a s 3 0 ．8 ％．O b s e r v a t i o nd i s i n t e g r a t i o no f f i l t e rp a p e r t h r o u g hm i c r o

19、 s c o p e f o u n de x p a n s i nh a d a p p a r e n t e d i s i n t e g r a t i o no n f i l t e rp a p e r ．6 ．W h e ns y n e r g i s mo f e x p a n s ，i n a n d c e l l u l a s er e a c t36 h ，g e t t i n gt h em o

20、s t r e d u c i n gs u g a r , t h es y n e r g i s t i c a c t i v i t yo f E X P A l p r o t e i n a n dE X P A 2 p r o t e i n d i s c e m w e r e4 1 ．9 ％a n d l 0 2 ．1 ％．T h e m o s tc o m p a t i b l ep H o fs y n e

21、 r g i s mr e a c t i n go f e x p a n s i na n d c e l l u l a s ew a s 4 ．0 ～5 ．0 ：t h em o s tc o m p a t i b l et e m p r e t u r ew a s 5 0 “ C ．7 ．W e c a ng e t t h e m o s t r e d u c i n gs u g a r w l h e n u s