苯并(a)芘暴露對(duì)真鯛(Pagrus major)細(xì)胞DNA的損傷及肝臟P4501A1的毒性效應(yīng).pdf

1、苯并(a)芘(B(a)P)是研究PAHs的典型代表,具有較強(qiáng)的致癌性,為了研究其對(duì)海洋魚(yú)類的生物效應(yīng),本研究以真鯛為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從細(xì)胞、蛋白和分子水平上,初步探討了B(a)P對(duì)真鯛的毒理學(xué)效應(yīng),檢測(cè)了暴露B(a)P的真鯛細(xì)胞DNA損傷變化、肝臟P4501A1基因誘導(dǎo)表達(dá)變化以及相應(yīng)蛋白酶EROD活性的變化,并比較了發(fā)生在不同水平的毒理學(xué)效應(yīng)之間的相互關(guān)系,獲得以下研究成果：1.克隆獲得的真鯛肝P4501A1 DNA、cDNA序列,序列分析表

2、明所獲得的我國(guó)真鯛P4501A1基因?yàn)轸~(yú)類P4501A1的一個(gè)同源性基因。2.用彗星實(shí)驗(yàn)對(duì)真鯛暴露于B(a)P三個(gè)濃度組(0.8μg/L、1.4μg/L和2.0μg/L)的DNA損傷水平進(jìn)行了了檢測(cè)：結(jié)果顯示從4 h到24 hDNA損傷呈升高趨勢(shì),而到了96 h以后,DNA損傷水平呈顯著下降,與對(duì)照組相比差別不顯著。進(jìn)一步優(yōu)化了彗星實(shí)驗(yàn)條件。在樣本數(shù)量多的情況下,用培養(yǎng)板板蓋鋪單層膠的彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方式與用載玻片鋪三層膠的“三明治”的方法

3、相比具有操作簡(jiǎn)便、節(jié)省時(shí)間、膠板不易破損等優(yōu)點(diǎn)。利用尾長(zhǎng)、尾長(zhǎng)/頭長(zhǎng)比、尾矩、尾DNA含量四個(gè)指標(biāo)可較真實(shí)準(zhǔn)確的顯示DNA損傷水平,指標(biāo)之間存在良好的相關(guān)性。3.暴露在B(a)P濃度0.8μg/L、1.4μg/L和2.0μg/L的真鯛肝臟EROD活性在4 h時(shí)被顯著誘導(dǎo),隨著時(shí)間的增加,EROD活性相應(yīng)的升高,在24 h EROD活性達(dá)到最高值。而在48 h后真鯛肝臟EROD活性迅速下降,到達(dá)96 h時(shí)與對(duì)照無(wú)顯著性差異。在暴露4 h后

4、,肝臟EROD活性與B(a)P濃度表現(xiàn)出很好的劑量-效應(yīng)關(guān)系。4.真鯛暴露在B(a)P三個(gè)濃度組(0.8μg/L、1.4μg/L和2.0μg/L)的P4501A1 mRNA被誘導(dǎo),而且染毒24 h,1.4和2.0μg/L濃度組的mRNA的誘導(dǎo)水平較高。P4501A1 mRNA與B(a)P濃度之間未見(jiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。5.分析暴露于B(a)P三個(gè)濃度組(0.8μg/L、1.4μg/L和2.0μg/L)的P4501A1 mRNA誘導(dǎo)水平