環(huán)境雌激素苯并[a]芘對乳腺癌細胞ZR75-1DNA MMR影響研究.pdf

1、錯配修復(mismatch repair,MMR)是最重要的DNA修復途徑之一,為正常細胞生命活動過程中維持基因組穩(wěn)定性所必需,該功能的減弱或喪失是導致惡性腫瘤發(fā)生的重要因為。因此,對各種細胞在不同生理和病理狀況下的DNAMMR功能活性進行監(jiān)測分析具有重要意義。目前DNA MMR.活性檢測技術主要是體外檢測法,均不能真實反映生物體內的真實狀況。本實驗室前期建立了一種基于GFP的活細胞DNA MMR活性檢測技術。本論文研究首先運用該技術對

2、幾種DNA MMR+與MMR-代表性細胞株的MMR功能活性在活細胞上進行了檢測,確證了該技術用于分析活細胞DNAMMR活性的有效性。進而運用這種“基于GFP的活細胞DNA MMR活性檢測技術”對環(huán)境雌激素苯并[a]芘對乳腺癌細胞ZR75-1細胞MMR的功能活性影響進行了研究,并從基因表達表達水平上探索了ZR75-1細胞MMR的功能活性受苯并[a]芘影響的因為。初步揭示了苯并[a]芘可通過下調MMR相關基因的表達水平而降低ZR75-1細胞

3、的MMR功能活性；同時也顯示了“基于GFP的活細胞DNA MMR活性檢測技術”在環(huán)境毒理學研究中應用的可行性。
　　 目的:進一步優(yōu)化基于GFP的活細胞DNAMMR活性檢測分析模型并拓展其應用。通過研究環(huán)境雌激素苯并[a]芘對乳腺癌細胞ZR75.1細胞MMR活性影響初步探索該技術在環(huán)境毒理學研究中應用的可行性。
　　 研究內容:1)用基于“GFP的活細胞DNA MMR活性檢測技術”分析檢測幾株DNA MMR+與MMR-代

4、表性細胞的MMR的功能活性；2)用基于“GFP的活細胞DNA MMR活性檢測技術”分析檢測苯并[a]芘對乳腺癌細胞ZR75-1的MMR活性的影響；3)檢測苯并[a]芘對乳腺癌細胞MMR系統(tǒng)重要基因表達水平的影響。
　　 結果:1)活細胞DNA MMR分析新模型高效精確的檢測兩組MMR活性正常組細胞和MMR活性缺失細胞。MMR活性正常細胞株HeLa與ZR75-1的錯配修復活性顯著高于MMR活性缺失細胞株RKO與HCT116(P<0

5、.001)；2)MMR功能正常的乳腺癌細胞ZR75-1細胞在1μM、5μM、10μM苯并[a]芘暴毒120 h后,各組細胞的EGFP相對表達值顯著低于對照組(P<0.05)；3)乳腺癌細胞ZR75-l在1μM、5μM、10μM B[a]P暴毒120 h,細胞內MMR相關基因hPMS1、GTBP、hMSH2、hMLH1 mRNA的表達水平降低,在0.01μM、0.1μM B[a]P暴毒120 h,細胞內MMR相關基因hPMS1、GTBP、

6、hMSH2、hMLH1 mRNA的表達水平升高,并且有隨著濃度的降低,mRNA表達水平有逐漸升高的趨勢。
　　 結論：當ZR75-l細胞在低濃度B[a]P(低于0.1μM)處理時,細胞可通過上調MMR系統(tǒng)重要基因的表達來保護細胞不受到損傷。但是高濃度的B[a]P(高于1μM)時,即超過了細胞修復損傷的能力,細胞內MMR重要基因表達被抑制,相應的細胞錯配修復能力下降,細胞修復損傷能力下降。這對揭示苯并[a]芘的毒理機制提供了新的視