雌激素對阿霉素引起的乳腺癌細胞凋亡的影響及其實驗研究.pdf

1、化療和內(nèi)分泌治療是激素受體陽性的乳腺癌患者內(nèi)科治療的兩個重要方面。理論上來說,雌激素能促進受體陽性的乳腺癌細胞更多的進入細胞周期的S期,而化療藥物則主要作用于癌細胞的S期,因此雌激素水平的高低勢必會影響化療藥物的作用。探討兩者的相互關(guān)系,將有利于制定合理的化療以及內(nèi)分泌治療方案與時機。為此,本實驗進行了臨床和體外細胞學的研究,通過了解雌激素對化療藥物引起的腫瘤細胞凋亡作用產(chǎn)生的影響來進一步的了解雌激素和化療藥物相互作用的關(guān)系。
　

2、　第一章雌激素水平和新輔助化療后乳腺癌組織標本中凋亡相關(guān)因子Bcl-2及Caspase-3表達的關(guān)系
　　目的：研究不同年齡段雌激素受體陽性的乳腺癌患者體內(nèi)雌激素濃度對新輔助化療后乳腺癌組織標本中凋亡相關(guān)因子Bcl-2及Caspase-3表達的影響及相互關(guān)系。
　　方法：我院乳腺科2008年1月至2010年5月接受兩周期CAF方案術(shù)前化療的乳腺癌患者按年齡分為A,B,C三組(≤35歲,36-49歲和≥50歲),共36例患者,

3、檢測所有患者化療前后血清雌二醇和化療后乳腺癌標本凋亡相關(guān)因子Caspase-3及Bcl-2的表達,分析三組患者血清雌二醇水平的變化與caspase-3及Bcl-2表達的關(guān)系。
　　結(jié)果：三組中,通過兩周期化療后,血清中雌激素水平均出現(xiàn)不同程度的下降,而相對于A組和C組,B組中雌激素水平下降幅度更大,且三組中雌激素水平均存在差異;Caspase-3的表達在三組中無明顯差異(p＞0.05),但在B組中略高(66.67％對58.33％,

4、50.00％)。Bcl-2的表達B組明顯低于A組及C組(25.00％對66.67％,75.00％;p＜0.05)。
　　結(jié)論：三組患者在化療兩周期后雌激素水平存在差異;而B組患者有較低的Bcl-2表達陽性率和略高的Caspase-3表達陽性率,這可能與雌激素水平相關(guān)。但本實驗也試圖進行兩者相關(guān)性的分析,可能由于樣本量偏少以及雌激素的標準差較大,沒有得出兩者有相關(guān)性的結(jié)論。
　　第二章雌激素對阿霉素引起MCF-7凋亡作用的影響

5、的體外細胞研究
　　目的：雌激素在體外實驗中對阿霉素引起的人乳腺癌細胞株MCF-7凋亡和增殖的影響。
　　方法：用不含雌激素的胎牛血清培養(yǎng)MCF-7細胞48小時后分為3組。A組:加入5組不同濃度的雌激素及不含雌激素的對照組進行培養(yǎng);B組:加入5組不同濃度的雌激素及不含雌激素的對照組進行培養(yǎng)同時加入阿霉素;C組:加入5組不同濃度的雌激素及不含雌激素的對照組進行培養(yǎng)同時加入阿霉素和雌激素拮抗劑他莫西芬。再采用Hoechst熒光染

6、色法,PI染色及AnnexinV-FITC流式細胞儀檢測分析各組細胞凋亡和細胞周期比例;用分光光度法檢測各組凋亡相關(guān)基因Caspase-3產(chǎn)生的酶活性,用RT-PCR法檢測各組凋亡相關(guān)基因Bcl-2及Bax的表達。
　　結(jié)果：A組細胞隨著雌激素濃度的增高,細胞周期中S期的比例明細增高,Bcl-2基因表達也明顯增高而Bax的表達降低;B組細胞中當雌激素濃度為10-9mmol/L時,細胞的凋亡率明顯增高(p＜0.05),Bcl-2基因

7、表達仍隨雌激素濃度的增高而增高,而Bax的表達仍逐漸降低;C組細胞總體的凋亡率無明顯差異,細胞均大部分停留在G0/G1期,Bcl-2和Bax的表達也失去差異性。Capase-3的表達在這三組中均無明顯差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論：10-9mmol/L濃度的雌激素可以增強阿霉素對MCF-7的殺傷作用,加入他莫西芬后完全阻斷雌激素受體使得這個差異性消失,過低濃度的雌激素由于不能使更多的細胞進入細胞周期S期,導致阿霉素對MCF-7細

8、胞的凋亡效應降低;而高濃度的雌激素抑制阿霉素對MCF-7細胞的凋亡作用可能與Bcl-2的表達增高Bax的表達降低有關(guān)。
　　第三章雌激素對阿霉素引起MCF-7凋亡作用的影響的動物實驗研究
　　目的：雌激素在MCF-7乳腺癌細胞株裸鼠移植瘤模型中對阿霉素誘導的MCF-7細胞凋亡抑制作用的影響。
　　方法：建立二十只裸鼠MCF-7乳腺癌細胞株移植瘤模型。然后分為四組。A組:吡柔比星1.5mg/kg尾靜脈注射,苯甲酸雌二醇繼

9、續(xù)10mg/kg/2day腹腔注射,B組:吡柔比星1.5mg/kg尾靜脈注射,苯甲酸雌二醇繼續(xù)5mg/kg/2day腹腔注射,C組:吡柔比星1.5mg/kg尾靜脈注射。D組:滅菌用水尾靜脈注射。然后,繪制腫瘤生長曲線,計算腫瘤的最終重量,用RT-PCR方法檢測Bcl-2表達水平。
　　結(jié)果：在腫瘤的生長曲線中,給藥后第九天,增長趨勢出現(xiàn)顯著差異;A,B,C三組與對照組即D組相比腫瘤的生長逐漸減慢(p＜0.05);A,B兩組與C組相

10、比腫瘤生長明顯減緩(p＜0.05);但是,A,B兩組相比沒有顯著性差異(p＞0.05)。在腫瘤的最終重量中;A,B,C三組與D組相比明顯降低(p＜0.05);A、B兩組與C組相比明顯降低(p＜0.05);但是,A,B兩組無顯著性差異(p＞0.05)。在Bcl-2的表達中;A,B兩組Bcl-2基因相比D組表達明顯增加(p＜0.05),C組Bcl-2基因表達相比D組明顯降低(p＜0.05);但是,A,B兩組無顯著性差異(p＞0.05)。