NO信號(hào)上調(diào)人肝細(xì)胞內(nèi)源FⅧ的表達(dá).pdf

1、目的：
　　通過對(duì)人永生化正常肝細(xì)胞LO2中凝血因子VIII（coagulation factor VIII,FVIII）啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白乙酰化和去乙酰化的研究，探索NO信號(hào)激活LO2細(xì)胞中FVIII高表達(dá)的分子機(jī)制。
　　方法：
　　建立L-精氨酸激活人肝細(xì)胞L02內(nèi)源凝血因子FVIII高表達(dá)的分子細(xì)胞模型。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人類永生化肝細(xì)胞LO2隨機(jī)分為：對(duì)照組和L-精氨酸組、組蛋白乙酰化抑制劑組和組蛋白去乙?；种苿┙M

2、。L-精氨酸組（L-精氨酸的終濃度10mM），對(duì)照組用同等體積的PBS取代L-精氨酸，組蛋白乙酰化抑制劑組（C646的終濃度25uM），組蛋白去乙?；种苿┙M（SAHA的終濃度50nM），分別培養(yǎng)0h、12h、24h、36h、48h、60h。用RT-PCR方法檢測(cè)各組中人FVIII基因的轉(zhuǎn)錄水平。用染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）分別檢測(cè)對(duì)照組，L-精氨酸組，組蛋白乙?；种苿┙M，組蛋白去乙?；种苿┙MFVIII基因啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白乙?；?/p>

3、平。構(gòu)建核轉(zhuǎn)錄因子（Nuclear factor kB,NF-kB1） flag標(biāo)簽質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染LO2細(xì)胞。用ChIP檢測(cè)NF-kB1與FVIII基因啟動(dòng)子區(qū)域轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合能力。
　　結(jié)果：
　　RT-PCR結(jié)果顯示L-精氨酸組和組蛋白去乙?；种苿┙M中FVIII基因表達(dá)上調(diào)，正常組和組蛋白乙?；种苿┙M中FVIII基因?yàn)楸镜妆磉_(dá)。ChIP檢測(cè)到L-精氨酸組和組蛋白去乙?；种苿┙M比正常組和組蛋白乙酰化抑制劑組中NF

4、-kB1與FVIII基因啟動(dòng)子區(qū)域轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合能力強(qiáng)，ChIP檢測(cè)到對(duì)照組和組蛋白乙?；种苿┙MFVIII基因啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白乙酰化水平為本底表達(dá)，L-精氨酸組和組蛋白去乙?；种苿┙MFVIII基因啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白乙?；教岣摺?br>　　結(jié)論：
　　上述研究表明組蛋白乙?；种苿┠苋∠鸏O2細(xì)胞中內(nèi)源人FVIII基因的上調(diào)，而組蛋白去乙酰化抑制劑能協(xié)同LO2細(xì)胞中內(nèi)源人FVIII基因的上調(diào)。NO信號(hào)在LO2細(xì)胞中通過