氨基菁類熒光染料用于腫瘤細(xì)胞的光學(xué)成像.pdf

1、雖然近些年來(lái)人們對(duì)腫瘤的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)移等機(jī)理的研究取得了許多進(jìn)展，但因?yàn)樵缙谠\斷不夠靈敏、特異性好的靶向藥物的缺乏以及無(wú)法進(jìn)行實(shí)時(shí)有效的治療監(jiān)測(cè)，惡性腫瘤仍然嚴(yán)重威脅著人類的健康與生命。腫瘤診斷治療學(xué)(Tumor theranostics)是最近提出來(lái)的一種用于腫瘤診斷與治療的新方法，其核心是將腫瘤治療與實(shí)時(shí)顯影有效結(jié)合，指導(dǎo)醫(yī)生不斷選擇合適的治療方案，提高腫瘤患者的生存率和生活質(zhì)量，為腫瘤個(gè)體化治療提供一種新思路。因此合成既具有腫瘤特異顯

2、影又能用于靶向治療作用的診斷治療劑具有十分重要的意義。
　　本文設(shè)計(jì)合成了一種基于環(huán)肽cyclo(-RGDyK-)的氨基菁類熒光染料的腫瘤探針?lè)肿覥y7-RGD，結(jié)構(gòu)未見報(bào)道。環(huán)肽cyclo(-RGDyK-)被公認(rèn)為是細(xì)胞粘附分子整合素αvβ3的拮抗劑，整合素αvβ3在幾種實(shí)體腫瘤細(xì)胞表面及幾乎所有腫瘤新生血管中特異性表達(dá)，目前基于環(huán)肽cyclo(-RGDyK-)的靶向整合素αvβ3的診療分子的研究已經(jīng)成為腫瘤診斷治療研究方向的熱

3、點(diǎn)。
　　本文首先采用Fmoc固相多肽合成法，以2-氯三苯甲基氯樹脂為載體，合成了環(huán)肽cyclo(-RGDyK-)，并在乙醚中重結(jié)晶，產(chǎn)率可達(dá)84％。然后我們基于課題組大斯托克斯位移氨基菁染料的前期研究成果，合成了一種基于環(huán)肽cyclo(-RGDyK-)的氨基菁類熒光染料Cy7-RGD。
　　其次對(duì)Cy7-RGD的光譜性質(zhì)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其在PBS(PH=7.4)中的最大激發(fā)波長(zhǎng)為617 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為754 nm，熒光

4、信號(hào)處于近紅外區(qū)，并且保持大斯托克斯位移(137 nm)。這種光譜性能表明其非常適合生物活體熒光成像研究。
　　然后，用Cy7-RGD分別培養(yǎng)了兩種腫瘤細(xì)胞U87MG及MCF-7，其中神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87MG是已知可以過(guò)度表達(dá)整合素αvβ3，而乳腺癌細(xì)胞MCF-7已知是幾乎不表達(dá)整合素αvβ3的。熒光共聚焦實(shí)驗(yàn)表明，Cy7-RGD在U87MG中聚集，但在MCF-7卻幾乎不聚集。通過(guò)加入未耦合的cyclo(-RGDyK-)來(lái)拮抗整合

5、素αvβ3發(fā)現(xiàn)可以抑制Cy7-RGD在U87MG中的聚集。上述結(jié)果說(shuō)明Cy7-RGD與整合素αvβ3的結(jié)合是非常特異性，表明Cy7-RGD具有特異性診斷神經(jīng)膠質(zhì)瘤的應(yīng)用潛力。
　　最后，MTT實(shí)驗(yàn)表明探針Cy7-RGD能特異性地抑制表達(dá)整合素αvβ3的U87MG細(xì)胞的繁殖，IC50值為8076nM。但其對(duì)不表達(dá)整合素αvβ3的肝癌細(xì)胞以及正常肝細(xì)胞的生長(zhǎng)卻只有很小的影響。表明Cy7-RGD具有靶向治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的應(yīng)用潛力，這在文獻(xiàn)