姜黃素磷脂復(fù)合物-吐溫混合膠束的研制.pdf

1、姜黃素是一種從姜科植物姜黃根莖中提取得到的酸性酚類物質(zhì)，其在中國、印度等國家具有悠久的使用歷史，具有藥食兩用的價值。研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素具有抗炎、抗氧化、抗感染等藥理作用；對癌癥、糖尿病、高血壓等常見慢性病具有良好的預(yù)防、治療作用。姜黃素安全性較高，人類大劑量口服使用無毒性反應(yīng)。但是姜黃素溶解度小、穩(wěn)定性較差和生物利用度低等缺陷，限制其臨床藥理作用發(fā)揮。
　　本研究首先對姜黃素理化性質(zhì)進行改造，通過溶劑法制備了姜黃素磷脂復(fù)合物，以復(fù)合

2、率為指標，對反應(yīng)條件進行單因素考察，得最佳處方工藝為：以體積比為3:4的無水乙醇-三氯甲烷混合溶劑為反應(yīng)溶劑，姜黃素與磷脂投料比為1:5(W/W)，反應(yīng)藥物濃度為1.5mg/mL，反應(yīng)溫度55℃，反應(yīng)時間3h，最終得到姜黃素磷脂復(fù)合物的復(fù)合率為96.4％。姜黃素不溶于正已烷，而磷脂復(fù)合物可在正己烷中溶解，說明姜黃素理化性質(zhì)改變；通過紅外光譜（FT-IR)、紫外光譜(UV)、熒光檢測對姜黃素磷脂復(fù)合物進行表征，結(jié)果顯示姜黃素和磷脂未形成新

3、的化合物，而是通過氫鍵或分子間作用力相連接；DSC圖譜顯示，磷脂復(fù)合物中姜黃素以無定型形式存在。
　　將姜黃素磷脂復(fù)合物和吐溫80，采用薄膜水化法制備得到姜黃素磷脂復(fù)合物/吐溫80混合膠束。以藥物增溶量和載藥量為考察指標，對混合膠束制備條件進行單因素考察，同時在水化液中加入不同種類、濃度的沉淀抑制劑，選出抑制沉淀析出效果好的沉淀抑制劑，得到混合膠束最佳工藝為姜黃素磷脂復(fù)合物（姜黃素10mg，磷脂50mg)中磷脂與吐溫80投料質(zhì)量比

4、為1:1，水化體積為2.5mL，水化時間1h，水化溫度37℃，水化液中沉淀抑制劑HPMC E15濃度為3mg/mL。對混合膠束理化性質(zhì)進行檢測，膠束粒子為球形、水合粒徑為144.6nm，多分散系數(shù)（PDI)為0.147，Zeta電荷為-41.6mV；DSC表征說明混合膠束中藥物以無定型形式存在；改變吐溫80加入量，通過藥物熒光圖譜變化確定膠束結(jié)構(gòu)，得出吐溫80參與混合膠束形成，與磷脂極性端相連的姜黃素形成疏水內(nèi)核，藥物周圍極性減小，姜黃

5、素熒光強度增強，最強吸收處波長發(fā)生藍移。使用不同pH、離子濃度的溶液對膠束制劑稀釋不同倍數(shù)，測定時間內(nèi)粒徑基本不變；pH、光照、溫度條件變化時，對膠束液中藥物進行紫外光譜掃描，制劑中藥物光譜形態(tài)無變化，藥物穩(wěn)定性顯著提高。對液體膠束制劑的體外釋放特性研究得出，相比原藥釋放量顯著增加。
　　使用減壓旋蒸干燥法將液體膠束固體化，對固化劑的種類、固體形態(tài)、藥物回收率、膠束粒子再分散性進行研究，優(yōu)選出AEROSIL200(A200)為固化

6、劑。得到固體制劑為粉末狀，固化劑對藥物吸附量較少，水化后粒徑分散性良好，有利于膠束制劑的長時間保存和分劑量使用。固體制劑影響因素試驗，結(jié)果顯示固體膠束制劑穩(wěn)定性較好。體外釋放實驗得出，含有HPMCE15的固體膠束隨pH增加藥物釋出速度加快，測定時間內(nèi)藥物持續(xù)釋出，無沉淀析出；而不含有HPMCE15的固體制劑，藥物在較高pH時快速溶出，隨后溶出量下降，說明HPMC E15可以維持藥物過飽和狀態(tài)，延長制劑穩(wěn)定時間。
　　體外細胞實驗使

7、用HepG-2細胞系為癌細胞模型，L-02為正常細胞模型，MTT法檢測姜黃素、磷脂復(fù)合物、混合膠束、空白載體材料（磷脂、吐溫80及兩者混合物）對細胞的毒性作用。檢測結(jié)果表明，藥物對癌細胞和正常細胞生長都有抑制作用，并存在劑量、時間依賴性。藥物在殺傷癌細胞的同時，對正常細胞也存在殺傷作用，說明將藥物制備成混合膠束后，并不能對細胞進行特異性識別，綜合得出細胞對藥物敏感程度為HepG-2細胞＞L-02細胞。空白材料中磷脂可以為細胞生長提供營養(yǎng)

8、，促進細胞生長；含有吐溫80的載體材料對癌細胞有毒性作用，對正常細胞基本無毒。細胞攝取研究利用姜黃素自身熒光性質(zhì)，通過細胞內(nèi)熒光強度判斷不同細胞對藥物攝取能力的差別；細胞內(nèi)藥物熒光強度隨時間延長逐漸增強，觀察發(fā)現(xiàn)，HepG-2癌細胞較L-02正常細胞攝取藥物量更多，與細胞毒性試驗一致；不同藥物形式進入細胞能力大小依次為混合膠束＞磷脂復(fù)合物＞姜黃素原藥，說明將姜黃素制備成混合膠束后有利于細胞攝取藥物。
　　采用HPLC法測定大鼠血漿

9、中姜黃素含量，以姜黃素混懸液為對照，考察了大鼠灌胃姜黃素混懸液、含吐溫80姜黃素混懸液、姜黃素磷脂復(fù)合物、固體姜黃素混合膠束水化液（添加和不添加HPMC)。藥動學(xué)結(jié)果顯示，與不含吐溫80的原藥組相比，吐溫80可以促進藥物體內(nèi)吸收；姜黃素磷脂復(fù)合物組與原藥混懸液組相比藥物峰濃度顯著增加，但消除較快，說明磷脂復(fù)合物可以促進藥物吸收，但對延長藥物體內(nèi)滯留時間作用不明顯；含有HPMC的混合膠束固化制劑較不含HPMC的膠束制劑，藥物峰濃度和體內(nèi)滯