單核細胞增生李斯特氏菌檢驗培養(yǎng)基和試劑

1、GB 4789.30—xxxx 11 附錄A 培養(yǎng)基和試劑 A.1 含 0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉湯（TSB-YE） A.1.1 成分 胰蛋白胨（胰酪胨） 17.0 g 多價胨 3.0 g 酵母膏粉 6.0 g 氯化鈉 5.0 g 磷酸氫二鉀 2.5 g 葡萄糖 2.5 g 蒸餾水 1 000 mL A.1.2 制法 將上述各成分加熱攪拌溶解，必要時調(diào)節(jié) pH，分裝，121 ℃高壓滅菌 15 min，備用。培

2、養(yǎng)基滅菌后 25 ℃的 pH 為 7.2±0.2。 A.2 含 0.6%酵母膏粉的胰酪胨大豆瓊脂（TSA-YE） A.2.1 成分 胰蛋白胨（胰酪胨） 17.0 g 多價胨 3.0 g 酵母膏粉 6.0 g 氯化鈉 5.0 g 磷酸氫二鉀 2.5 g 葡萄糖 2.5 g 瓊脂 15.0 g 蒸餾水 1 000 mL A.2.2 制法 將上述各成分加熱攪拌溶解，必要時調(diào)節(jié) pH 至 7.

3、2±0.2，分裝，121 ℃高壓滅菌 15 min，冷卻到 47 ℃～50 ℃，傾倒在無菌的平皿中，備用。培養(yǎng)基滅菌后 25 ℃的 pH 為 7.2±0.2。 A.3 Fraser 增菌肉湯（FB1、FB2） A.3.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A.3.1.1 成分 胰蛋白胨（胰酪胨） 5.0 g 牛肉膏粉 5.0 g 酵母膏粉 5.0 g GB 4789.30—xxxx 13 酵母膏粉 10.0 g 丙酮酸

4、鈉 2.0 g 葡萄糖 2.0 g 甘油磷酸鎂 1.0 g 硫酸鎂（無水） 0.5 g 氯化鈉 5.0 g 氯化鋰 10.0 g 磷酸氫二鈉（無水） 2.5 g 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃葡萄糖苷（5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucopyranoside） 0.05 g 瓊脂 15.0 g 蒸餾水 930 mL* 注：*表示如果用兩性霉素 B 替代環(huán)己酰亞胺，基

5、礎(chǔ)培養(yǎng)基配制體積改為 925 mL。 A.4.1.2 制法 將上述各成分加熱攪拌溶解， 必要時調(diào)節(jié)pH， 分裝， 121 ℃高壓滅菌15 min， 冷卻到47 ℃～50 ℃。培養(yǎng)基滅菌后 25 ℃的 pH 為 7.2±0.2。 A.4.2 添加劑 A.4.2.1 0.4% 萘啶酮酸溶液 將 0.02 g 萘啶酸鈉鹽溶于 5 mL 氫氧化鈉中，并通過 0.45 μm 無菌濾膜過濾除菌。 A.4.2.2 0.4%頭孢他啶溶液 將

6、0.02 g 頭孢他啶溶于 5 mL 蒸餾水中，用 0.45 μm 的無菌濾膜過濾除菌。 A.4.2.3 多粘菌素 B 溶液 將 76 700IU 硫酸多粘菌素 B 溶于 5 mL 蒸餾水中，用 0.45 μm 的無菌濾膜過濾除菌。 A.4.2.4 2%環(huán)己酰亞胺溶液 將 0.05 g 環(huán)己酰亞胺溶于 2.5 mL 無水乙醇中，然后加蒸餾水 2.5 mL，用 0.45μm 的無菌濾膜過濾除菌。 A.4.2.5 0.1%兩性霉素 B 溶液

7、（作為環(huán)己酰亞胺溶液的替代品） 將 2.5 mL 鹽酸 （1 mol/L） 和 7.5 mL 二甲基甲酰胺 （DMF） 混合成 HCl/DMF 溶液， 加 0.01 g 兩性霉素溶解后，用 0.45 μm 的無菌濾膜過濾除菌。 A.4.2.6 L-α-磷脂酰肌醇溶液 將 2 g 的 L-α-磷脂酰肌醇溶于 50 mL 的水中（可以使用 2 g 含有 9％～15％的未分級磷脂酰肌醇的大豆卵磷脂代替 L- α-磷脂酰肌醇） ， 攪拌約 30