[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶類LSD1抑制劑的設(shè)計(jì)、合成及其抗腫瘤活性評(píng)價(jià).pdf

1、表觀遺傳修飾中組蛋白修飾是非常重要的研究的方向。組蛋白賴氨酸特異性去甲基化酶1（LSD1）是于2004年被首次發(fā)現(xiàn)的組蛋白修飾酶，其在輔酶黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）參與下，能夠特異性去除H3K4和H3K9的單、雙甲基化。除此之外，LSD1能夠去除非蛋白底物（如轉(zhuǎn)錄因子E2F1、抑癌基因p53、DNA甲基轉(zhuǎn)移化酶1）的甲基化來(lái)調(diào)控細(xì)胞的生物學(xué)功能。研究表明，LSD1在很多腫瘤細(xì)胞（如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌等）中的活性或表達(dá)量高于對(duì)

2、應(yīng)的正常細(xì)胞，通過(guò)對(duì)LSD1的活性或者表達(dá)量進(jìn)行抑制能夠有效地抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。所以，開(kāi)發(fā)一種用于腫瘤治療的高效且高特異性的LSD1抑制劑具有很重要的意義。
　　我們?cè)O(shè)計(jì)合成了一系列全新的[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶類 LSD1抑制劑并進(jìn)一步評(píng)價(jià)了它們對(duì)MGC-803, EC109, A549和PC-9腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性，以及對(duì)LSD1的抑制活性。其中一些化合物對(duì)LSD1表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制活性，能夠選擇性地抑制腫瘤細(xì)胞A

3、549和PC-9的生長(zhǎng)。其中化合物6l能夠抑制腫瘤細(xì)胞PC-9的生長(zhǎng)( IC50=0.59μM)，優(yōu)于5-FU。進(jìn)一步構(gòu)效關(guān)系表明，化合物6l-m對(duì)所測(cè)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)均有抑制作用，其抑制活性均高于5-FU和GSK2879552。我們發(fā)現(xiàn)化合物5p、5q和6i對(duì)LSD1具有較好的抑制活性，其IC50分別為0.154、1.19和0.557μM。分子模擬對(duì)接表明化合物5p與Val333形成芳香氫的相互作用，同時(shí)與周圍的氨基酸Ala331, M

4、et332和Ala539殘基形成氫鍵?；衔?p能夠顯著抑制MGC-803和PC-9腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，并且具有濃度依賴性，但是其對(duì)E-cadherin和 N-cadherin的表達(dá)具有不同的影響。我們使用AnnexinⅤ-FITC雙染法檢測(cè)化合物6l對(duì)MGC-803細(xì)胞凋亡的影響。我們發(fā)現(xiàn)化合物6l能夠誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞MGC-803凋亡比例隨濃度的增加而增加，呈現(xiàn)濃度依賴性。我們使用化合物5p在PC-9和MGC-803腫瘤細(xì)胞中對(duì)LSD1及其

5、底物進(jìn)行調(diào)節(jié)。結(jié)果表明化合物5p能夠在細(xì)胞水平對(duì)LSD1的表達(dá)量進(jìn)行抑制，使細(xì)胞中LSD1的表達(dá)量明顯減少。其能夠特異性上調(diào)細(xì)胞中蛋白底物H3K4me1和H3K4me2的表達(dá)，而對(duì) H3K4me3的表達(dá)沒(méi)有影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶骨架為未來(lái)開(kāi)發(fā)用于腫瘤治療的LSD1抑制劑開(kāi)啟了新的起點(diǎn)。
　　總之，本課題組設(shè)計(jì)合成了以三氮唑并嘧啶為基本骨架的全新的LSD1抑制劑，保留三氮唑并嘧啶基本骨架，通過(guò)盡可