生物大分子與光譜探針相互作用動力學(xué)研究及分析應(yīng)用.pdf

1、本文利用分光光度法研究了生物大分子與光譜探針偶氮氯膦Ⅲ、結(jié)晶紫和二甲酚橙的相互作用及其動力學(xué)反應(yīng)機(jī)理，并建立了動力學(xué)法測定生物大分子的新體系。研究了反應(yīng)條件、共存離子干擾、動力學(xué)參數(shù)等。并借助熒光光度法、紅外光譜法等光譜分析證明了該反應(yīng)機(jī)理。具體內(nèi)容如下： 第1章綜述了近年來蛋白質(zhì)分析研究的方法和成果。 第2章在0.01 mol/L硫酸介質(zhì)及沸水浴條件下，研究了蛋白質(zhì)阻抑KIO<,4>氧化偶氮氯瞵Ⅲ褪色的反應(yīng)，通過測量催

2、化和阻抑體系中偶氮氯膦Ⅲ在550 nm處的吸光度，計算ΔA，建立了測定痕量蛋白質(zhì)的新方法，蛋白質(zhì)的濃度在0～6 mg/L范圍與催化反應(yīng)速度呈良好的線性關(guān)系，方法的檢出限為2.9×10<'-13>mg/L。對實(shí)際樣品進(jìn)行了測定，回收率為96～109％。研究了動力學(xué)反應(yīng)機(jī)理，確定為假一級動力學(xué)行為，活化能增加了67.77 KJ/mol。 第3章利用動力學(xué)法研究了堿性條件下結(jié)晶紫與蛋白質(zhì)之間的相互作用。實(shí)時測量了反應(yīng)的進(jìn)程，確定了蛋白

3、質(zhì)與結(jié)晶紫的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(n)，反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)(AE)，研究了蛋白質(zhì)存在的下結(jié)晶紫醇化反應(yīng)的機(jī)理。確定蛋白質(zhì)與結(jié)晶紫存在兩種作用位點(diǎn)，蛋白質(zhì)對結(jié)晶紫的醇化反應(yīng)在不同時期分別起催化和阻抑的作用。并提出了測定蛋白質(zhì)的動力學(xué)吸光光度法。人血清蛋白質(zhì)濃度在0.005～11 mg/L，牛血清白蛋白濃度在0.005～8 mg/L范圍內(nèi)與ΔA呈線性關(guān)系，檢出限均為2.1×10<'-13>mg/L。 第4章在酸性溶液中，研究了過氧化氫氧化結(jié)晶紫(

4、CV)褪色，DNA對該氧化褪色反應(yīng)起阻抑作用(反催化作用)，采用流水冷卻的辦法終止反應(yīng)，據(jù)此建立了一種測定微量DNA的動力學(xué)分析新方法。DNA的含量在0～1.0 mg/L范圍內(nèi)與抑制褪色的程度呈線性關(guān)系，檢測限為0.004 mg/L。優(yōu)化了實(shí)驗的條件，初步提出了動力學(xué)反應(yīng)測定微量DNA的機(jī)理。 第5章本章研究了在稀硫酸介質(zhì)中，蛋白質(zhì)靈敏地阻抑溴酸鉀氧化二甲酚橙的褪色反應(yīng)。研究了反應(yīng)條件，及阻抑反應(yīng)的機(jī)理，建立了動力學(xué)光度法測定痕