麥麩酯酶抑制法檢測(cè)果蔬中有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥的研究.pdf

1、SichuanAgriculturalUniversityMaster’SDegreeDissertationEnzymeInhibitionDeterminationMethodoforganophosphorusandCarbamatePesticidesWithEsterasefromWheatBranMajorByJiangLuDirectedbyProfZhangZhiqingFoodScienceMay2016摘要農(nóng)產(chǎn)品中的

2、農(nóng)藥殘留問題已越來越引起各國(guó)政府和公眾的關(guān)注，因此必須對(duì)農(nóng)藥使用加以控制，加強(qiáng)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)力度。酶抑制法快速檢測(cè)農(nóng)藥殘留技術(shù)對(duì)所測(cè)樣品的前處理要求簡(jiǎn)單、成本低、檢測(cè)時(shí)間短，非常適合我國(guó)小規(guī)模、分散的銷售體系中經(jīng)常性的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，而且由于植物酯酶來源廣、成本低、提取方便、易保存等優(yōu)點(diǎn)，弓l起許多學(xué)者的關(guān)注，以期能替代乙酰膽堿酯酶。麥麩是小麥加工的副產(chǎn)物，產(chǎn)量約占小麥加工量的20％，來源更廣、價(jià)格更低廉。本研究以麥麩為原料提取麥麩酯酶，

3、探索了麥麩酯酶純化前后對(duì)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的敏感性及動(dòng)力學(xué)常數(shù)，并對(duì)檢測(cè)方法中前處理的優(yōu)化、假陽(yáng)性的消除進(jìn)行研究。主要研究結(jié)果如下：1通過比色法研究了酶抑制法檢測(cè)農(nóng)殘時(shí)表面活性劑對(duì)固藍(lán)B鹽顯色體系的增敏作用及農(nóng)藥最佳抑制時(shí)間。結(jié)果表明：以陰離子表面活性劑SDS作為增敏劑，在吸收波長(zhǎng)535nm處檢測(cè)，可使反應(yīng)體系相對(duì)吸光度值增加了15276％。在酶活抑制率測(cè)定時(shí)除葉蟬散外，其余5種農(nóng)藥對(duì)麥麩酯酶的最佳抑制時(shí)間為30min，而葉蟬散最

4、佳抑制時(shí)間為40min。2在酶抑制法最佳檢測(cè)體系下以酶活抑制率為指標(biāo)，分別研究了純化前后的麥麩酯酶對(duì)6種農(nóng)藥的敏感性及最低檢測(cè)限。結(jié)果顯示：未經(jīng)純化的麥麩酯酶對(duì)6種農(nóng)藥的最低檢測(cè)限范圍是0006～045mg／L，與GB27632014規(guī)定的最大殘留量相比，除甲基對(duì)硫磷之外，均可滿足對(duì)敵敵畏、樂果、葉蟬散、丁硫克百威、西維因5種農(nóng)藥的檢測(cè)要求。而經(jīng)過凝膠層析后的麥麩酯酶對(duì)6種農(nóng)藥的最低檢測(cè)限范圍是00030193mg／L，其靈敏度比粗酶液

5、提高了11~23倍。經(jīng)過雙水相萃取的麥麩酯酶對(duì)6種農(nóng)藥的最低檢測(cè)限范圍是O0050116mg／L，其靈敏度比粗酶液提高了13522倍。而經(jīng)過硫酸銨鹽析后的麥麩酯酶對(duì)6種農(nóng)藥的最低檢測(cè)限范圍是00394)386mg／L，該麥麩酯酶對(duì)農(nóng)藥的敏感性明顯低于未經(jīng)純化的麥麩酯酶。3通過雙分子反應(yīng)速率常數(shù)的測(cè)定方法，利用可見分光光度計(jì)測(cè)定了6種農(nóng)藥抑制麥麩酯酶動(dòng)力學(xué)常數(shù)(Kj、K。、K2)及IC50值。比較動(dòng)力學(xué)常數(shù)及ICso值發(fā)現(xiàn)，各農(nóng)藥對(duì)麥麩酯