2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、南極魚類常年生活在-1.9℃的南大洋中,目前已知魚體適應(yīng)這種低溫的一個機制是進化出了抗凍糖蛋白(antifreeze glycoproteins,AFGPs),而南極魚卵被產(chǎn)在海水中,無AFGPs的保護,那么南極魚卵在這種低溫環(huán)境下是如何存活的呢?卵殼蛋白(zona pellucida,ZP)是一類識別精卵結(jié)合的蛋白,已有研究表明,南極魚Notothenioids亞目魚類ZP基因發(fā)生了大量擴增,可能與南極魚適應(yīng)極端寒冷水域有關(guān)。本實驗室

2、前期研究發(fā)現(xiàn),卵殼蛋白ZPC5(zona pellucida c5,ZPC5)在南極魚卵巢中大量表達,但是其具體功能尚不清楚。實驗室前期研究從鱗頭犬牙南極魚的卵巢中克隆得到了三種DmZPC5基因(Dissostichus mawsonizona pellucida c5,DmZPC5),分別命名為DmZPC5_1(zona pellucida protein ZPC5 isoform1)、DmZPC5_2(zona pellucida

3、protein ZPC5 isoform2)、DmZPC5_3(zona pellucida protein ZPC5 isoform3),且編碼的蛋白質(zhì)長度逐漸縮短。為了明確DmZPC5是否參與魚類抗凍過程及其低溫下分子調(diào)控機制,本研究在中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary,CHO)中過表達DmZPC5,隨之給予CHO細胞一定程度的低溫處理,通過統(tǒng)計CHO細胞的存活率,來探討DmZPC5在魚類抗凍過程中的作用。

4、本研究結(jié)果表明,DmZPC5有可能參與南極魚魚卵抗凍過程。具體結(jié)果如下:
  1)將從實驗室獲得的DmZPC5重組質(zhì)粒進行測序鑒定,測序結(jié)果表明,三種DmZPC5基因編碼區(qū)全長分別為1629bp、1482bp、1389bp,其所編碼的氨基酸數(shù)目分別為543、494、463。
  2)重組質(zhì)粒雙酶切電泳結(jié)果顯示,DmZPC5_1、DmZPC5_2、DmZPC5_3基因重組質(zhì)粒載體經(jīng)雙酶切電泳后,均有兩條對應(yīng)的電泳條帶,表明目的

5、基因均正確插入到pIRES2-EGFP載體上。
  3) Western Blot檢測結(jié)果顯示,目的蛋白DmZPC5_1、DmZPC5_2、DmZPC5_3均能在CHO細胞中高效表達,0℃低溫處理后,CHO細胞內(nèi)的DmZPC5的蛋白表達量明顯高于37℃培養(yǎng),表明了低溫下DmZPC5的穩(wěn)定性與溫度相關(guān),即外源蛋白DmZPC5在低溫下更穩(wěn)定。
  4)存活率檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),過表達DmZPC5的CHO細胞在0℃處理16 h后,其存活

6、率較對照組顯著上升(P<0.001),-2℃處理4h、8h后,存活率也均較對照組顯著上升(P<0.01),證明DmZPC5在低溫下可以促進細胞的存活。并且DmZPC5_1、DmZPC5_2、DmZPC5_3對CHO細胞的存活率影響各不相同,瞬時表達DmZPC5_1蛋白的CHO細胞存活率最低,瞬時表達DmZPC5_3蛋白的CHO細胞存活率最高。
  5)對低溫處理的CHO細胞進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,結(jié)果表明,外源性蛋白DmZP

7、C5_1在0℃低溫處理后,蛋白聚合體明顯上調(diào),而DmZPC5_2、DmZPC5_3均無蛋白聚合體的產(chǎn)生,僅有蛋白單體量明顯上調(diào),這可能與其在低溫下對CHO細胞的存活率差異有關(guān)。
  總而言之,本研究通過對瞬轉(zhuǎn)DmZPC5的CHO細胞進行低溫脅迫處理,探討了CHO細胞內(nèi)DmZPC5_1、DmZPC5_2、DmZPC5_3的蛋白表達量變化以及CHO細胞在低溫下存活率。第一方面,低溫下,CHO細胞中DmZPC5蛋白表達量較37℃高,有可

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