P311結(jié)合蛋白的篩選與功能初步研究.pdf

1、肺是生物機(jī)體重要的呼吸器官，肺的主要結(jié)構(gòu)由肺內(nèi)導(dǎo)管部(支氣管樹)和無數(shù)肺泡所組成。哺乳動物肺的發(fā)育通常描述為4個時期：假腺期、小管期、原始肺泡期和肺泡期。其原始肺泡期和肺泡期與肺泡的形成關(guān)系最為密切。我們之前通過抑制差減雜交篩選出一系列可能的肺泡發(fā)育相關(guān)調(diào)節(jié)基因，其中基因P311同時特異性高表達(dá)于原始肺泡期和肺泡期，因此我們推測該基因表達(dá)的蛋白P311在肺的發(fā)育中發(fā)揮著極為重要的作用。由于P311蛋白N端具有可與其他蛋白相互作用的PES

2、T結(jié)構(gòu)域，因此我們希望通過對其結(jié)合蛋白的篩選與研究，探知該基因在肺發(fā)育過程中的作用。我們利用酵母雙雜交技術(shù)，構(gòu)建小鼠肺組織cDNA文庫，并以融合Gal4 DNA結(jié)合域(DNA binding domain，BD)的P311為誘餌蛋白篩選文庫。通過將所得的432個酵母雙雜交陽性克隆進(jìn)行測序、排除假陽性蛋白及回復(fù)驗證，并選擇其中可能對肺發(fā)育具有潛在功能的基因，利用免疫共沉淀和雙分子熒光互補(bǔ)等方法進(jìn)行進(jìn)一步驗證。最終確定Galectin-1、