虎斑烏賊肌肉糖蛋白分離純化、結構分析及其抗氧化活性初步研究.pdf

1、虎斑烏賊(Sepia pharaonis)是一種大型頭足類動物，主要生活在南海海域，具有口味鮮美、對餌料消化充分、養(yǎng)殖潛力大、對環(huán)境適應性強、生長迅速等特點，同時蛋白質(zhì)含量高，EPA/DHA比例高，具有較高的營養(yǎng)價值和藥理功效。研究表明，從烏賊墨、烏賊殼中提取的多糖、蛋白復合物等物質(zhì)顯示出良好的抗腫瘤活性，從與烏賊相類似的海洋動物中提取的多糖、蛋白質(zhì)和萜類等物質(zhì)也具有抗腫瘤、抗衰老、增強免疫力、抗高血壓、抗氧化等作用。為了更好地利用這些

2、活性物質(zhì)，需要對其進行提取、分離純化、結構分析、生物活性方面的研究。本課題以虎斑烏賊肌肉為試驗材料，研究了虎斑烏賊肌肉糖蛋白的提取、脫蛋白、分離純化、初步結構及其抗氧化活性。主要研究結果如下:
　　采用響應面法優(yōu)化虎斑烏賊肌肉糖蛋白(SPMG)的鹽法提取工藝。研究了NaCl濃度、液料比、提取時間和提取溫度對SPMG得率的影響，在單因素實驗的基礎上，通過四因素三水平的Box-Behnken設計優(yōu)化，得到的最佳提取工藝參數(shù)是:NaCl

3、濃度3.8％，液料比20.78mL/g，提取時間為1.48 h，提取溫度為66.03℃，在此條件下，SPMG得率為7.93％。
　　采用正交實驗優(yōu)化SPMG Sevage法脫蛋白工藝，同時測定硫酸銨沉淀SPMG所需飽和度以及SPMG的等電點。結果表明SPMG采用Sevage法脫蛋白得到的最佳工藝參數(shù)為:樣液與試劑的比例為2∶1(V/V)，氯仿與正丁醇的比例為6∶1(V/V)，振搖時間15 min，靜置時間40 min，脫蛋白4次，

4、此時脫蛋白率可達到67.97％;硫酸銨溶液飽和度為80％時沉淀SPMG效果最佳;SPMG的等電點為5.6。
　　SPMG經(jīng)DEAE-Cellulose52離子交換層析和SephadexG-100分子篩層析后，得到兩個不同組分SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ，采用高效凝膠滲透色譜（HPGPC）和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)驗證SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ的純度，結果表明為均一組分，其分子量分別為42.5 kDa和36.3

5、kDa。
　　對比β-消去反應前后紫外掃描圖譜，顯示SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ都有O-糖肽鍵的存在;紅外光譜結果表明SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ中存在糖和蛋白復合物的特征吸收峰，糖苷鍵類型都為吡喃型;氨基酸分析結果表明，SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ中富含酸性氨基酸，天冬氨酸和谷氨酸占總氨基酸含量的百分比分別為40.20％和36.75％，SPMG-Ⅰ和SPMG-Ⅱ中含量最高的氨基酸均為谷氨酸，其含量分別為28.04％和20.07％;采用