富硒綠茶糖蛋白的分離純化及結(jié)構(gòu)初步研究.pdf

1、本論文以湖北恩施地區(qū)生產(chǎn)的富硒綠茶為原料，對綠茶中硒的分布形態(tài)進(jìn)行研究。從富硒綠茶中提取、分離和純化得到含硒糖蛋白并進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，為富硒茶的開發(fā)利用提供了一定的理論依據(jù)。本論文的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　探究了富硒茶中硒的分布，按照Osborne分級法順序提取茶葉蛋白，分析硒含量，同時測定其氨基酸組成和分子量分布。結(jié)果顯示富硒綠茶中硒主要存在于蛋白質(zhì)中，占有機(jī)硒含量的71.3％，水溶性蛋白和堿溶性蛋白是茶葉硒結(jié)合蛋白的主要蛋白，其硒

2、含量分別為0.563、0.281 mg Se/g protein。在水溶性蛋白，醇溶性蛋白，堿溶性蛋白中，天門冬氨酸，絲氨酸，谷氨酸，精氨酸含量最多。HPGPC檢測顯示四種溶解性蛋白的相對分子量分布范圍為958-3183757Da、1108-2562665Da、114.8-5782584Da和1135-3240Da。
　　依次采用飽和硫酸銨沉淀、DEAE Sepharose F.F.離子交換樹脂、Sephacryl400凝膠分離純

3、化水溶性蛋白。結(jié)果顯示60％的飽和硫酸銨沉淀效果最好，得率為6.4％;茶硒結(jié)合糖蛋白經(jīng)離子交換和凝膠純化得到3個組分，TSBGP1-1、TSBGP2-1和TSBGP3-1，其蛋白硒含量依次為4.32％、3.96％和14.36％，多糖含量分別為67.6％、54.4％和26.6％。HPGPC檢測顯示TSBGP1-1、TSBGP3-1為單一峰，其分子量分別為4418Da、3726Da。熱重分析表明TSBGP在相同加熱條件(0-500℃)下的失

4、重趨勢基本相似，在225-351℃范圍內(nèi)發(fā)生了劇烈的氧化分解反應(yīng)。
　　采用紫外吸收、糖肽鍵特征分析、紅外光譜、氨基酸組成分析、離子色譜分析、MALDI-TOF/TOF、NMR等技術(shù)方法，探討了茶硒結(jié)合糖蛋白的結(jié)構(gòu)信息。結(jié)果顯示TSBGP1-1、TSBGP2-1和TSBGP3-1在280nm紫外光下都有吸收峰，茶硒結(jié)合糖蛋白TSBGP糖肽鍵型為O-糖肽鍵。茶硒結(jié)合糖蛋白中氨基酸組成含量最高的3種氨基酸依次為天門冬氨酸、甘氨酸、絲氨