人類神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與功能.pdf

1、_=95S525茲一j粵失學(xué)學(xué)校代_‰10246學(xué)。q：03—1022002博士學(xué)_：：l立論文_～，一’‘?！?。人類神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子的～結(jié)構(gòu)●性質(zhì)與功能o≥j=_j一：。一二』一一’，院系(所)：化學(xué)系專一業(yè)：無(wú)機(jī)化學(xué)姓名：蔡斌指導(dǎo)教師：黃仲賢教授完成日期：2006年4月15日、^一一?！?7hGIF獨(dú)有的保守T(5)CPCP(9)序列尤其重要。2)我們還發(fā)現(xiàn)，Thr5側(cè)鏈上的羥基基團(tuán)同生理活性密切相關(guān)，人為地除去羥基將導(dǎo)致突變體生物

2、活性嚴(yán)重喪失。參考突變體蛋白結(jié)構(gòu)和反應(yīng)性的結(jié)果，我們認(rèn)為一方面111r5的羥基可能通過(guò)形成分子內(nèi)氫鍵幫助穩(wěn)定hGIF的結(jié)構(gòu)，另一方面Thr5也是一個(gè)潛在地磷酸化位點(diǎn)。3)再次，雖然保留了TCPCP序列，但是E23K突變體完全失去了神經(jīng)元生長(zhǎng)抑制功能。以往的研究指出，E23K除了金屬硫簇的暴露程度提高，其光譜學(xué)性質(zhì)和反應(yīng)性均和野生型hGIF相似。盡管E23K喪失生理活性的原因有待進(jìn)一步研究，我們的結(jié)果說(shuō)明除了TCPCP序列，13結(jié)構(gòu)域中的

3、其它殘基也可以影響hGIF執(zhí)行其功能。4)我們還發(fā)現(xiàn)，在d結(jié)構(gòu)域中，改變E(55)AAEAE(60)插入段的電荷分布，或者增加它形成d螺旋的傾向，并不太多地影響整個(gè)突變體蛋白的生物活性。然而，EAAEAE插入段缺失干擾了蛋白的正?；钚?。對(duì)氆結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)解析表明，EAAEAE插入段在hGIF蛋白中是一段非常松散、不受約束的無(wú)規(guī)卷曲，它使得q結(jié)構(gòu)域的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)更加活潑。進(jìn)一步，Ⅱ結(jié)構(gòu)域也通過(guò)結(jié)構(gòu)域問(wèn)的相互作用，影響到D結(jié)構(gòu)域，間接的改變了p

4、結(jié)構(gòu)域的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)和：其它相關(guān)性質(zhì)，從而干擾了hGIF蛋白的生理活性。5)最后，在hGIF中l(wèi)inker的部分或完全缺失對(duì)活性沒(méi)有太大的影響，可是，當(dāng)用SP(甲殼綱動(dòng)物MT的linker)取代KKS(哺乳動(dòng)物MT的linker)作為linker時(shí)，突變體KKS—SP的生物活性就基本喪失了。從進(jìn)化的角度看，這也是自然界為什么選用保守的KKS作為liner的一個(gè)原因。有研究指出，在酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)中hGIF能與Rab3A蛋白相互作用，并且hG

5、IF和GDP瓜ab3A的結(jié)合具有特異性(KD=26州)。Rab3A屬于Ras家族，能夠結(jié)合GTP，并具有GTP水解酶活性。當(dāng)Rab3A與GTP結(jié)合時(shí)，GTP／Rab3A形成具有活性的蛋白構(gòu)象，通過(guò)和下游蛋白相互作用引發(fā)一系列過(guò)程，調(diào)節(jié)神經(jīng)元突觸囊泡的運(yùn)輸；當(dāng)Rab3A將結(jié)合的GTP水解成GDP后，GDP／Rab3A結(jié)構(gòu)的構(gòu)象發(fā)生變化，蛋白失去活性。同時(shí)，Rab3A和GDP或GTP的這種結(jié)合也受到多種蛋白的調(diào)控，包括GEPs(guanin