MBTH法測定多糖水解酶活力的研究.pdf

1、多糖水解酶類是自然界中廣泛分布的酶類，幾乎每種生物--動物、植物、藻類、細菌、古細菌、真菌，甚至噬菌體中都發(fā)現(xiàn)這類酶的存在。已被廣泛應用于飼料、食品、醫(yī)藥、能源、造紙、紡織等行業(yè)中，成為各個領域的研究熱點。3－甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)法具有成本低、操作簡單、靈敏度高、精密度好和準確度高等優(yōu)點，近年來已被應用于還原糖的含量檢測。由于MBTH法在測定還原糖方面還處于研究階段，因此本論文首先將MBTH法與傳統(tǒng)的多糖水解酶活力檢測方法

2、進行比較，并進行檢測條件的優(yōu)化；然后將MBTH法應用于木聚糖酶和溶菌酶的活力測定，建立多糖水解酶活力測定的新方法。并將其應用于海參體壁多糖水解酶的活力測定，研究多糖水解酶在海參自溶過程中的作用。本論文主要包括以下研究內容：
　　 1．對MBTH法、DNS法和鐵氰化鉀法在還原糖測定方面進行比較研究
　　 用MBTH法、3,5-二硝基水楊酸(DNS)法和鐵氰化鉀法分別測定了葡萄糖，木糖，巖藻糖，阿拉伯糖，N-乙酰氨基葡萄糖，

3、氨基葡萄糖等六種還原糖，對測定結果的比較分析表明：新方法MBTH法測還原糖的精密度和回收率與DNS法和鐵氰化鉀法相近；MBTH法測還原糖的靈敏度最高，鐵氰化鉀法次之，DNS法最低。因此MBTH法特別適合還原糖的微量測定。
　　 2．建立MBTH法測定木聚糖酶活力的新方法
　　 對MBTH法在木聚糖酶活力測定方面進行了研究。首先以木糖為標準品，對MBTH法測還原糖的檢測條件進行了研究；其次在最適檢測條件下測定木聚糖酶活力，

4、并對該方法在酶活力測定中的幾個關鍵參數(shù)進行了深入研究；最后確定了MBTH法測定木聚糖酶的最低檢測限和定量限，并進行了方法驗證，結果表明：該方法靈敏度高，準確度高，結果穩(wěn)定，適用于木聚糖酶的活力測定。
　　 3．建立MBTH法測定溶菌酶活力的新方法
　　 對MBTH法在溶菌酶活力測定方面進行了研究。首先以N-乙酰氨基葡萄糖為標準品，對MBTH法的檢測條件進行了研究；其次使用半脫乙酰度的殼聚糖為底物，研究了該方法在酶活力測定

5、中的幾個關鍵參數(shù)；最后建立了酶反應動力學曲線，確定了動力學參數(shù)，并進行了方法驗證，結果表明MBTH法適合于溶菌酶的活力測定
　　 4．MBTH法在海參體壁多糖水解酶活力測定中的應用研究
　　 對MBTH法在海參體壁多糖水解酶方面進行了研究。首先通過高效液相色譜測出海參自溶后其體壁多糖含量有所減少，證明海參自溶過程中有多糖水解酶的參與；然后對海參體壁的自溶酶進行提取，分離純化，測定各收集管酶液的蛋白酶活力，以確定酶活的存在