海參中多糖水解酶的提取與性質(zhì)研究.pdf

1、本文著重研究海參體壁中的多糖水解酶，以期探尋該酶系與海參體壁自溶溶的相關(guān)性，為海參加工工藝中如何防止海參自溶提供理論依據(jù)。據(jù)研究內(nèi)容及結(jié)果如下：首先，建立了一種靈敏度較高的多糖水解酶活力測定方法-MBTH法。對MBTH法測定多糖水解酶活力做了參數(shù)優(yōu)化，并與目前使用較多的DNS法、鐵氰化鉀法做了比較。通過對比發(fā)現(xiàn)，MBTH法無論是對還原糖的檢測還是對多糖水解酶活力檢測的靈敏度均高于DNS法及鐵氰化鉀法，它的檢測限分別為4.63μM和2.9

2、1U/mL。DNS法測定樣品酶活力時工作濃度范圍較大，但只對高濃度還原糖檢測比較靈敏、準(zhǔn)確，對低濃度度還原糖檢測不靈敏且曲線不呈線性。與鐵氰化鉀法相比MBTH法測定酶活力時，工作范圍比較大，且靈敏度更高。MBTH法能夠?qū)⒏咄糠治鰬?yīng)用于海參體壁中多糖水解酶的活力測定，且得到與試管法類似的結(jié)果，并且操作方便，一次處理量大，可節(jié)省90%的試劑。
　　其次，本文采用了勻漿浸提、硫酸銨鹽析及透析等生化方法，從海參體壁中提取粗酶，并對該粗酶

3、的部分性質(zhì)進行了初步探討。以殼聚糖、可溶性淀粉、甘露聚糖、海帶多糖、木聚糖、纖維素鈉和葡聚糖為底物，發(fā)現(xiàn)粗酶中存在能夠作用于這些底物、水解底物中的α-1，3、α-1，4和β-1，4糖苷鍵的多糖水解酶。粗酶中存在最適pH為9.0的殼聚糖酶、淀粉酶、海帶多糖酶、木聚糖酶和纖維素酶。粗酶中的多糖水解酶具有良好的熱穩(wěn)定性，在80℃及以上溫度下滅活30min后仍具有30-60%的殘留活性。這些酶的熱穩(wěn)定性良好，推斷其對海參自溶具有影響相關(guān)性。

4、r>　　再次，將粗酶中的淀粉酶經(jīng)過DEAE-52陰離子交換層析和Sephacryl S-300凝膠層析后得到了純化了18.42倍的酶，通過SDS-PAGE電泳發(fā)現(xiàn)該酶具有三個亞基鏈，分子量分別為99.3 kDa、122.5 kDa和198.2 kDa。對該淀粉酶進行部分特性研究發(fā)現(xiàn)，該酶的最適pH為9.0，最適溫度為80℃，是一種高溫淀粉酶，并且具有較強的熱穩(wěn)定性，在90℃下滅活30min后仍具有30%以上的殘留活性。Fe3+和Mn2+