60~70%最大攝氧量有氧運動后大鼠心房肌差異蛋白質(zhì)的篩選及其表達研究.pdf

1、目的：通過對中小強度有氧運動后大鼠心房肌蛋白質(zhì)組表達特征的研究，篩選出對運動產(chǎn)生反應的應激蛋白質(zhì)，并進一步探討應激蛋白質(zhì)的基因表達水平，為運動心臟蛋白質(zhì)組學的后繼研究提供實驗基礎。
　　 方法：20只SD雄性大鼠隨機分為運動組和對照組(n＝10)，運動組大鼠采用跑臺訓練建立中小強度(60～70％最大攝氧量)有氧運動動物運動模型。8周后，提取心房肌組織全蛋白進行雙向凝膠電泳(2—DE)，使用ImageMaster2D Platin

2、um圖像分析軟件對2—DE圖譜進行分析，篩選出差異表達的蛋白質(zhì)點，并應用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI—TOF—MS)獲得其中表達量變化≥5倍的蛋白質(zhì)點的肽質(zhì)量指紋譜，通過搜索數(shù)據(jù)庫進行蛋白質(zhì)鑒定，并采用實時定量逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈式反應(RT—PCR)技術(shù)檢測6個目標蛋白質(zhì)的mRNA表達水平。
　　 結(jié)果：①8周中小強度有氧運動后，大鼠的心臟重量增加了1．7％，心重指數(shù)增加了32％；②經(jīng)圖像分析，運動組和對照組心房肌

3、電泳圖譜中平均檢測到蛋白質(zhì)點(380±62)個和(411±59)個，獲得差異大于2倍的蛋白質(zhì)點68個。其中，獲得具有5倍以上差異表達量的蛋白質(zhì)點14個，7個表現(xiàn)為上調(diào)，7個表現(xiàn)為下調(diào)。對差異表達的14個蛋白質(zhì)點進行質(zhì)譜分析，成功鑒定出11種蛋白質(zhì)，如心臟脂肪酸結(jié)合蛋白、熱休克蛋白60、線粒體ATP合成酶亞基d、ATP合酶偶合因子6、蛋白組氨酸磷酸酶1、原肌球蛋白α4鏈等；③RT—PCR結(jié)果顯示：運動組大鼠心房肌中蛋白組氨酸磷酸酶1、熱休

4、克蛋白60、ATP合酶偶合因子6、線粒體ATP合成酶亞基d、原肌球蛋白α4鏈、心臟脂肪酸結(jié)合蛋白的基因表達水平均上調(diào)，且具有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。5個目標蛋白質(zhì)中，只有熱休克蛋白60和蛋白組氨酸磷酸酶1的蛋白表達水平和基因表達水平一致，其他的均不一致。
　　 結(jié)論：①長時間中小強度有氧運動后，大鼠心房肌蛋白質(zhì)發(fā)生了適應性變化。②質(zhì)譜確證的心臟脂肪酸結(jié)合蛋白、線粒體ATP合成酶亞基d和ATP合酶偶合因子6等目標蛋白與提高心肌